论文部分内容阅读
本文主要工作如下：
1.本研究从带菌状态的黑解粘液、背鳍等部位分离到菌株FZ09，其生理生化特性与海分枝杆菌Rl相同，并且将两株菌同时进行人工感染黑鳃的实验，黑裙发病率为0。海分枝杆菌属于条件致病菌，不容易引发正常组织病变，而保留在正常组织中，部分水产动物尤其是一些硬棘类动物，其感染海分枝杆菌后可以不发病，处于带菌状态。这种携带海分枝杆菌感染而不发病死亡的硬棘水产动物往往是感染软棘鱼类甚至是人类的罪魁祸首。
2.本研究利用HPLC技术与生理生化及PCR技术共同鉴定出分离的菌株FZ09为海分枝杆菌，表明研究结果的准确性。实验发现分枝菌酸指纹图谱鉴定技术的稳定性、重复性很高，为分枝杆菌的鉴定提供了更为可靠准确的方法。
3.用不同碳源成分的培养基培养海分枝杆菌FZ09四周，菌落生长结果显示:与Na2C03,Tween80,Tween20相比，甘油是最好的碳源成分，可以促进海分枝杆菌生长旺盛。Tween80对菌株的快速鉴定有一定优势。海分枝杆菌对于有机碳源的选择与结核分枝杆菌存在区别。
4.用海分枝杆菌FZ09的全菌细胞免疫鼠制备抗血清，ELISA方法测得血清抗体效价为6400，说明菌株FZ09具有很强的抗原性，能够有效地刺激鼠产生免疫应答。经IFAI，检测发现，FZ09的抗血清能够与分枝杆菌属的其它细菌发生交叉反应，与非分枝杆菌属细菌则没有交叉，表明该血清是检测分枝杆菌免疫学特征的有效工具。
5.28℃及34℃培养的细菌蛋白条带分布相同，主要有:97kDa,84kDa,56kDa,50kDa,45kDa,35kDa,28kDa,23kDa,19kDa,11kDaoWestern-blot分析显示其中仅有1条45kDa蛋白条带具有良好的抗原性。蛋白等电点在双向电泳图谱上的偏酸性端，分布范围在pH4.5-5.5。而37℃培养时的蛋白条带明显减少，缺少的主要条带有:23kDa、19kDa,11kDa，并且没有抗原免疫蛋白带，蛋白等电点分布区域减少。45kDa蛋白可能与海分枝杆菌的致病性有关，而37℃条件下，海分枝杆菌可能改变了细胞结构，失去原有的抗原性及致病特点。
6.3种不同方法提取的脂多糖经电泳银染后，有多条相同条带，主要是在14kDa,16kDa及23kDa分子量处形成了几条较为清晰的条带，Western-blot及间接ELISA实验结果显示提取物与抗血清结合部位主要为核心多糖成分。类脂A部分由于分子量较大，所带电荷的原因不容易跑开，聚集在凝胶上部，核心多糖由于分子量较小则快速迁移至胶的底部，多糖侧链根据分子量的大小依次分布，但多糖链不明显。这3条蛋白带可以为海分枝杆菌亚单位疫苗的开拓提供参考。
7.进行血清学检测时发现海分枝杆菌对腹腔注射组的昆明鼠具有感染能力，其肝脏出现肉芽肿;以细菌脂多糖作为反应底物的敏感度要明显高于细菌全菌，而且各感染组都表现为明显的阳性结果;其次，昆明鼠各感染组的值要显著高于大鼠各组，表明该菌株对小鼠的感染比大鼠强三种方法提取的脂多糖检测病原血清的敏感性不同，脂多糖1的敏感性最低，脂多糖3的敏感性最高，脂多糖的检测能力均高于海分枝杆菌颗粒本身，表面脂多糖可能对于海分枝杆菌疾病诊断有一定的参考价值。