【摘 要】
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肌球蛋白X(Myosin X,Myo X)是一种只在脊椎动物中表达的非传统的肌球蛋白,它在微丝、微管的相互作用中行使使命,这暗示着Myo X与细胞迁移存在联系。本实验室已有结果表明Myo
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肌球蛋白X(Myosin X,Myo X)是一种只在脊椎动物中表达的非传统的肌球蛋白,它在微丝、微管的相互作用中行使使命,这暗示着Myo X与细胞迁移存在联系。本实验室已有结果表明Myo X在细胞与胞外基质之间的黏附中起作用并影响细胞迁移。N-Cadherin是跨膜糖蛋白的钙粘素家族的重要成员之一,现有的研究结果表明N-Cadherin与细胞骨架微管相互作用,在E-Cadherin低表达的细胞中转染N-Cadherin可以增加细胞迁移能力,提高细胞黏附效率,提示N-Cadherin能促进细胞的迁移、侵袭能力。N-Cadherin通过调节细胞骨架和胞外基质之间的关系而控制中心粒和细胞核的位置以及细胞极性。中和N-cadherin活性能减弱细胞定向迁移、丝足形成、极性以及在伤口愈合中高尔基体的重定向。
我们应用RNA干涉技术减低内源性Myo X在NLT细胞中的表达,首先我们通过Transwell分析发现,表达Scramble miRNA和Myo X miRNA的NLT细胞定向迁移效果有明显差异,Myo X miRNA细胞迁移的数目明显减少,说明Myo X miRNA导致细胞的迁移能力降低:胶原凝胶分析在同样的实验条件下,转染了Myo X miRNA的NLT细胞迁移的距离缩短、并且细胞迁移失去方向性；用Wound healing伤口愈合分析,免疫荧光染色标记的高尔基体检测细胞极性,结果表明转染了Myo X miRNA的细胞其极性发生改变,失去了在血清诱导下高尔基体朝向伤口排列的极性特征；免疫荧光染色标记Myo X和N-Cadherin两种蛋白,在NLT细胞中有共定位现象,沉默Myo X使N-Cadherin的表达量降低,Western blot结果进一步验证了N-Cadherin的表达与内源性Myo X相关。本研究表明减低Myo X在NLT细胞中的表达降低降低细胞的迁移能力,影响细胞的迁移方向,并使N-Cadherin的表达下调。本研究为进一步利用外植体培养以及利用CmRH转基因鼠研究Myo X在CmRH神经细胞迁移过程中的作用奠定了基础。
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