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目的：卵巢癌(ovarian cancer)是世界上妇科第一位的致死疾病。因卵巢癌早期阶段症状不明显导致大部分患者被诊断时已经播散到腹腔和远处转移。虽然随着外科手术技巧的提高以及新的药物和化疗方案的出现，但大多数患者出现复发，只有极少数能得到根治，致使5年生存率仍只在20％-25％之间，复发和转移是导致卵巢癌患者死亡的主要原因。卵巢癌的发生是一个多基因改变多步骤发展的复杂过程，包括抑癌基因的失活和癌基因的激活。因此，探讨卵巢癌发生远处转移的分子机制、寻找有效分子靶向治疗，对于制定临床综合治疗卵巢癌计划具有重要的意义。EZH2基因是多梳基因家族的一员，定位于人染色体7q35位置上，其编码的蛋白含有高度保守的SET结构域，该结构域具有甲基转移酶的活性，通过甲基化作用抑制下游基因的表达。在细胞特性的维持、细胞周期的调控和肿瘤的发生中均起着重要的作用。越来越多的证据表明EZH2在人类许多恶性肿瘤如口腔癌，食管癌，胃癌，大肠癌，肝癌，膀胱癌，乳腺癌，前列腺癌和内分泌肿瘤中高表达。EZH2基因的异常表达与肿瘤的恶性进展和患者预后差密切相关。在我们之前研究中，在肝癌细胞株中下调EZH2的表达后可以逆转肝癌细胞株在裸鼠模型中的致瘤活性，首次在体外实验中证实了抑制EZH2基因的治疗价值。但是至今，EZH2在卵巢癌中的分子表达情况以及潜在的致瘤活性仍未清楚。本研究旨在探讨癌基因EZH2基因在卵巢癌增殖与侵袭、转移中的作用及相关的分子机制.
方法：利用免疫组化和FISH法检测在包含有许多良性肿瘤、交界性肿瘤和侵袭性恶性肿瘤的卵巢癌组织芯片的蛋白表达和基因扩增情况。进一步利用RT-PCR和Western Blot检测EZH2基因在卵巢癌新鲜组织中的表达，并利用统计学相关性分析EZH2过表达与卵巢癌病理参数的关系。然后利用Western Blot筛选EZH2高表达的卵巢癌细胞株，瞬时转染siRNA靶向敲除EZH2基因，通过MTT绘制细胞生长曲线、细胞周期与Transwell侵袭小室测定法分析EZH2与卵巢癌细胞株增殖、侵袭能力的关系；应用Real-time PCR转移芯片技术，筛选卵巢癌细胞株中EZH2基因沉默后的差异表达的肿瘤相关基因，然后应用Western Blot验证差异表达基因的蛋白水平；免疫组化检测卵巢癌组织芯片中EZH2和差异表达基因的蛋白表达并分析它们的相关性。
结果：⑴13对新鲜卵巢癌组织用于RT-PCR的检测，其中11(84.6％)对表现为癌组织EZH2表达明显高于配对的正常卵巢组织。在9对新鲜卵巢癌组织用于Western Blot的检测，其中7对(77％)表现为癌组织中EZH2表达明显高于配对的正常卵巢组织。EZH2表达上调与卵巢癌患者临床病理特征密切相关，EZH2与卵巢癌的组织学分级，pT/pN/pM分期以及FIGO分期正相关。EZH2高表达与卵巢癌患者预后差明显相关，EZH2高表达患者平均生存期为49.5个月，而EZH2低表达患者生存期有110.0个月，两者差异具有统计学意义，P＜0.001。FISH检测发现，本组卵巢癌中有8.8％(9/102)的病例存在EZH2基因扩增，而且全部9例均存在EZH2蛋白过度表达。⑵用siRNA干扰的方法降低了内源性高表达EZH2的卵巢癌细胞株HO-8910细胞中EZH2的表达水平可抑制细胞增殖。⑶siRNA干扰的方法降低了内源性高表达EZH2的卵巢癌细胞株HO-8910细胞中EZH2的表达水平可以在体外抑制细胞的迁移和侵袭能力。⑷利用Real-Time RT-PCR芯片筛选EZH2 siRNA干扰后mRNA水平受到调节的与肿瘤转移相关的基因。然后挑选了E-cadherin and TGF-β1两个基因，利用WB方法再去检测其蛋白水平改变。发现TGF-β1在EZH2干扰组明显下调，而E-cadherin明显升高。在卵巢癌组织中，EZH2的表达与TGF-β1的表达呈明显的正相关，TGF-β1阳性表达与EZH2表达上调的卵巢癌中TGF-β1阳性表达明显高于无EZH2表达上调的病例(p＜0.01)。而EZH2在E-cadherin高表达和E-cadherin低表达卵巢癌的差异无明显统计学意义(P＞0.05)。
结论：①卵巢癌组织中EZH2的表达水平明显高于正常卵巢组织。EZH2表达上调与卵巢癌的临床病理特征密切相关，肿瘤分级高、淋巴结转移、远处转移或临床分期晚者EZH2表达上调比例明显增高。EZH2表达上调是卵巢患者预后不良的一个独立预测分子指标。EZH2在卵巢癌的发生与发展过程中可能起十分重要的癌基因作用，有可能成为将来分子靶向治疗卵巢癌的潜在靶点。②EZH2小分子RNA可以抑制卵巢癌细胞的体外迁移、侵袭能力，这种作用可能是通过调节TGF-β1的表达来实现的。