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目的: 研究三七总皂苷(total saponins of Panax notoginseng，tPNS)对源自大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells，rBMSCs)的血管新生的影响，获得tPNS与BMSCs联合应用有助于BMSCs的存活和血管生成的实验资料，为解决BMSCs移植治疗心肌梗死时，细胞在心肌缺血微环境下存活率低影响临床应用的难题提供新思路。 方法: 1.rBMSCs的分离、纯化与鉴定。 采用密度梯度分离法，从大鼠骨髓中分离BMSCs，并于体外纯化、扩增。流式细胞术检测rBMSCs的表面标志CD29+、CD106+、CD44+和CD45+。 2.rBMSCs增殖及tPNS的影响 将BMSCs接种于96孔板培养，tPNS(0，0.03，0.1，0.3，1，3，10，30，100，300μg/mL)刺激48h，MTT法，酶标仪490nm检测OD值，以OD值代表细胞增殖率。以此实验结果为依据确定本实验的tPNS低、中、高浓度，MTT法检测培养10d细胞生长曲线。 3.细胞培养上清中VEGF含量检测 rBMSCs接种于96孔培养板培养，tPNS刺激（0，1，10，100μg/mL），分别于第2、4、6、8、10d收集培养上清，ELISA检测培养上清中VEGF浓度。 4.细胞VEGF基因表达的检测 rBMSCs接种于25 cm2塑料培养瓶，tPNS刺激(0，1，10，100μg/mL)48h，Trizol Reagenl提取总RNA，在qRT-PCR仪上用一步法检测VEGF基因表达量。 5.rBMSCs的内皮诱导及体外血管新生实验 用含EGM-2的HG-DMEM内皮诱导培养液诱导BMSCs14 d，免疫细胞化学及免疫荧光染色检测Ⅷ因子相关抗原、荆豆凝集素并行细胞摄取Dil-ac-LDL实验。 体外血管新生实验用Matrigel基质胶内皮细胞管形成分析实验模型。 6.rBMSCs联合Matrigel移植在体血管生成实验 实验分为空白对照组、实验对照组、tPNS低、中、高浓度组。rBMSCs与冰浴中的Matrigel等量混合，取400μl皮下注射于SD大鼠腹前区正中线两侧，空白对照组以等量培养液代替rBMSCs。术后常规喂养，按实验分组腹腔注射血栓通（50μg/kg，低浓度组;100μg/kg，中浓度组;150μg/kg，高浓度组。）或生理盐水（对照组）。10d终止实验，取出Matrigel移植体，分别测定其血红蛋白含量和VEGF含量，部分种植体组织切片，Masson染色，检测微血管面积。 结果: 1.rBMSCs形态学特征及流式细胞术鉴定 细胞接种48h，首次换液后，贴壁细胞呈梭形或为体积较大的圆形单个核细胞。4d后，可见纺锤形贴壁细胞。6d后，多个细胞形成集落。传代后，细胞体积增大，呈长梭形，成纤维细胞样。融合的细胞单层呈涡旋状。流式细胞术检测第四代rBMSCs表面抗原，CD29+阳性细胞数为77.1％，CD44+阳性细胞为21.3％，CD106+和CD45+阳性细胞分别为5.5％和4.0％。 2.tPNS对rBMSCs增殖能力的影响。 tPNS促进rBMSCs细胞增殖。tPNS刺激细胞48h，浓度从0.03至100μg/mL范围内，均有促细胞增殖作用。取1.0μg/mL、10.0μg/mL和100μg/mL为tPNS的低，中，高浓度组。连续检测10d细胞增殖率，结果显示，培养第2至6天，tPNS低，中，高浓度组分别较对照组增高13.7％～36.7％、35.5％～65.2％和23.3％～70.8％，均P＜0.01;第8天以后，增殖率与对照组比较虽仍有增高，但增高幅度较小。 3.tPNS促进rBMSCs分泌VEGF 在对照组，细胞培养至第2，4，6，8，10天，培养上清中VEGF浓度分别为682.7±128.4pg/mL、830.6±71.0 pg/mL、778.8±63.9 pg/mL、802.7±49.3 pg/mL和683.7±194.1 pg/m。与对照组比较，tPNS低、中、高浓度组细胞培养至第4至10天，VEGF浓度分别较对照组增高20.3％～28.5％，67.9％～109.3％和101.0％～248.1％，均P＜0.01。 4.tPNS上调rBMSCs的VEGF基因表达 实时荧光定量逆转录PCR检测结果表明，tPNS上调VEGF mRNA水平。与对照组比较，tPNS的低，中、高浓度组分别增高36％、22％和89％，P＜0.01或P＜0.05。 5.tPNS促进rBMSC-ECs体外血管新生 第三代rBMSCs用内皮诱导培养液培养，14d后分化为内皮样细胞(rBMSC-EC)，rBMSC-ECs在Matrigel基质胶上培养24h，形成毛细血管样结构。tPNS组管的数量和管的长度均较对照组明显增加。毛细管总长度为对照组的2.17倍（1μg/mL组）、1.42倍（10μg/mL组）和1.90倍（100μg/mL组），P＜0.05或P＜0.01。 6.tPNS促进rBMSCs联合Matrigel移植在体血管生成 Matrigel移植体血红蛋白含量:空白对照组Hb含量很低，实验对照组是空白对照组的1.8倍，P＜0.01;tPNS低、中、高浓度组分别是实验对照组的1.38倍、1.51倍和1.69倍，均P＜0.01。Matrigel移植体VEGF浓度:实验对照组较空白对照组增高3.11倍，P＜0.01，tPNS低、中、高浓度组较实验对照组分别增高15.9％、41.2％和67.6％，均P＜0.01。微血管面积测定:实验对照组较空白对照组增高18.02倍，P＜0.01，tPNS低、中、高浓度组较实验对照组分别增高22.1％、34.5％和56.4％，均P＜0.05。 结论: 以上结果提示，三七总皂苷促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖、向微血管分化及诱导新血管生成，其机制涉及血管内皮生长因子基因表达上调和蛋白分泌增加。