应用酵母双杂交系统筛选中国文昌鱼神经胚中与BMP相互作用的蛋白及BMP与DDAH相互作用的研究

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本文应用酵母双杂交技术,构建了文昌鱼BMP成熟蛋白的酵母融合表达载体pGBKT7-Bmp,通过Western-blot和酵母转化筛选,确证了pGBKT7-Bmp在酵母细胞中正确表达且不具有自主激活报告基因的活性,可作为酵母双杂交系统中的“诱饵”。为研究BMP信号途径的组成、功能和机理奠定了基础。   本文通过分析文昌鱼DDAH重组蛋白水解ADMA的活性,发现文昌鱼DDAH具有高等动物中dimethylargininedimethylaminohydrolase(DDAH)的催化活性,为DDAH的同源物。RT-PCR结果显示文昌鱼DDAH只在原肠胚、神经胚表达,而在成鱼中不表达,这与高等脊椎动物广泛的表达模式明显的不同,这可能与文昌鱼这种特殊的进化地位有关,同时也说明文昌鱼的DDAH与胚胎的早期发育有关。   本文通过酵母双杂交系统筛选出与文昌鱼BMP相互作用的蛋白,对于认识文昌鱼BMP信号调节的机制和胚胎发育的分子机理具有重要的意义。
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