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目的：幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）感染世界约50％人口，并与慢性活动性胃炎、胃溃疡和胃癌密切联系。Hp感染的机体中存在特异性调节性T细胞(regulatory T cells，Treg)，抑制机体对Hp的过度免疫应答，但同时造成机体对Hp的免疫无能。本研究拟通过消减小鼠Treg细胞，研究小鼠Treg细胞在抗Hp感染的免疫保护的作用机制；同时CpG-ODN作为免疫佐剂，研究CpG-ODN能否通过TLR9通路逆转Treg细胞的抑制功能，阐明CpG-ODN增强疫苗免疫保护的机制。 方法：1、调节性T细胞对Hp疫苗免疫保护作用机制研究：19只SPF级C57BL/6小鼠随机分成3组，①WCS+anti-CD25组：注射Hp全细胞裂解物（WCS）和弗氏佐剂的混合液；②WCS组：注射WCS和弗氏佐剂的混合液；③PBS对照组：注射PBS和弗氏佐剂的混合液。其中WCS+anti-CD25组在免疫前4d注射抗CD25抗体，1W后加强免疫。末次免疫后4W采集小鼠血液，间接ELISA检测抗Hp抗体IgG、IgG1和IgG2a水平。用Hp菌液攻击小鼠，末次攻击4W后处死小鼠，胃组织Hp定量细菌培养评价Hp的定植水平；流式细胞术分析脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞、CD80+、CD19+和CD8a+细胞；ELISA测定脾细胞上清IFN-γ、IL-4、IL-12和IL-17水平。 2、CpG-ODN佐剂增强Hp疫苗的免疫保护效果研究：28只SPF级C57BL/6小鼠随机分成4组①PBS对照组；②WCS组；③WCS+ODN2088组；④WCS+ODN1826组。用WCS免疫小鼠,1W后加强免疫。末次免疫后4W采集小鼠血液，间接ELISA检测抗Hp抗体IgG、IgG1和IgG2a水平。用Hp菌液攻击小鼠，末次攻击4W后处死小鼠，胃组织Hp定量细菌培养评价 Hp的定植水平；流式分析脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞、CD80+、CD19+和CD8a+细胞；并测定脾细胞上清IFN-γ、IL-4、IL-12和IL-17水平。 结果：1、调节性T细胞对Hp疫苗免疫保护作用机制研究： 1.1疫苗免疫后，小鼠产生抗特异性抗体 IgG，且 WCS+anti-CD25组诱导 IgG水平明显高于WCS组（P＜0.01），WCS+anti-CD25组小鼠血清IgG1，IgG2a也显著高于WCS组（P＜0.01），且血清IgG1，IgG2a滴度变化基本与IgG类似。 1.2流式细胞仪分析脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞，WCS+anti-CD25组低于WCS组（P＜0.01）；CD8a+细胞和CD80+细胞，WCS+anti-CD25组高于WCS组（P＜0.05）；CD19+细胞，WCS+anti-CD25组和WCS组无显著差异（P＞0.05）。 1.3WCS+anti-CD25组Hp定值密度低于WCS组（P＜0.01），提示WCS+anti-CD25组免疫小鼠抵抗 Hp攻击效果优于WCS组。 1.4与WCS组比较，WCS+anti-CD25组脾细胞上清分泌IFN-γ、IL-4、IL-12和IL-17水平均显著增高（P＜0.01），说明去除 Treg细胞有助于提高 Th1和Th2类细胞因子的分泌水平。 2、CpG-ODN佐剂增强 Hp疫苗的免疫保护效果： 2.1疫苗免疫后，小鼠产生抗特异性抗体IgG，且WCS+ODN1826组诱导IgG、IgG1，IgG2a显著高于WCS组（P＜0.01）。 2.2流式细胞仪分析脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞，WCS+ODN1826组低于WCS组（P＜0.01）；CD8a+细胞，WCS+ODN1826组高于 WCS组（P＜0.01）；CD19+细胞和CD80+细胞，WCS+ODN1826组和WCS组无显著性差异（P＞0.05）。 2.3 WCS+ODN1826组Hp定值密度低于WCS组（P＜0.01）。 2.4与WCS组比较，WCS+ODN1826组脾脏细胞上清分泌IFN-γ、IL-4、IL-12和IL-17水平均显著增高（P＜0.01）。 结论：1、通过消减Treg细胞能显著增强Hp疫苗诱发的Th1和Th2混合的细胞免疫和体液免疫应答，以及增强CD8+T细胞的杀伤功能和抗原提呈细胞的递呈作用，从而增强Hp疫苗的免疫保护作用。 2、CpG-ODN通过激活TLR9信号通路，通过减少Treg细胞数量，逆转Treg细胞免疫抑制功能，CpG-ODN可能通过活化巨噬细胞、DC，促进IL-6分泌，间接抑制Treg的功能，产生偏向Th1型的免疫应答，从而增强Hp疫苗的免疫保护作用。