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肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是我国高发的恶性肿瘤之一，原发性肝癌中占85％以上，位居恶性肿瘤死亡率第三位。手术切除、局部消融、肝脏移植和经皮肝动脉化疗栓塞术(TACE)等综合治疗是目前肝肿瘤常用的治疗方法。外科手术切除是现阶段HCC诊治方式中的首选，然而，肿瘤切除术后5年内复发率高达80％，长期存活率依旧不尽理想。还有相当一部分肝癌患者就诊时已处于晚期，即使能够手术切除肿瘤的病人，由于术后早期复发、肿瘤远处转移等原因，其预后也很差，患者3年和5年生存率只有66％和20％。因此，急需探索和筛查肝细胞癌预后判断和复发转移预测的标记物，从而提高肝癌的诊治效果，改善患者的预后。对肝细胞癌复发及转移过程中分子机制的深入研究对准确判断患者的预后及筛选新的潜在治疗靶点有着重要的临床意义。 研究表明:肿瘤代谢有望成为肿瘤发生及进展机制研究的突破口，谷氨酰胺（Glutamine，Gln）分解代谢活跃与有氧糖酵解(Warburg效应)是恶性肿瘤代谢的两大特征。随着肿瘤代谢研究的不断深入，肿瘤的特异性谷氨酰胺代谢可能为肿瘤治疗提供了新的思路与靶点。 在哺乳动物中有肾型谷氨酰胺酶(Gls1)和肝型谷氨酰胺酶(Gls2)两种谷氨酰胺酶，它们都是谷氨酰胺代谢过程中的关键酶。其中GLS1在多种肿瘤如肝细胞癌、乳腺癌和前列腺癌中表达明显升高，在正常肝脏组织中高表达，在肿瘤组织中表达显著降低，而GLS2在肿瘤与癌旁组织中却表现出相反的结果。提示Gls1可能与肿瘤有着密切关系，但是Gls1在肝细胞癌发生发展过程中所起的的作用仍未见文献报道。 本研究通过检测99例肝细胞癌患者癌组织、癌旁组织和相对应正常肝脏组织中Gls1蛋白的表达，从而评价Gls1是否有助于肝细胞癌患者的预后判断、以及准确预测肿瘤恶性程度及复发。运用SiRNA干扰技术下调肝细胞癌细胞系中Gls1的表达，观察其对肝细胞癌细胞的生长及侵袭、转移潜能的影响，并进一步研究了Gls1的改变对上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin表达的影响，从而初步探索Gls1调控肝细胞癌侵袭与转移能力的分子机制。 第一部分 Gls1和E-cadherin、 Vimentin在肝细胞癌中表达及其与临床病理特征的关系 目的:通过检测Gls1、E-cadherin及Vimentin在肝细胞癌组织和对应的癌旁肝脏组织中的表达差异，阐明Gls1与EMT标志物上皮细胞粘附分子钙粘蛋白E-cadherin和间质相关蛋白Vimentin在肝细胞癌中的表达及三种蛋白之间的相关性，探讨Gls1与肝细胞癌临床病理特征之间的关系及其在肝细胞癌预后判断中的价值。 方法:应用免疫组化方法检测99例肝细胞癌患者病理组织切片中Gls1、E-cadhrein、Vimentin的表达;运用Western Blot技术检测99例肝细胞癌组织、癌旁组织中Gls1、E-cadhrein、Vimentin蛋白的表达。SPSS19.0软件及Image J进行数据统计分析。结果:免疫组化及Western Blot结果均显示在肝细胞癌组织中Gls1表达高于癌旁组织，两者之间差异有统计学意义(p＜0.05)。EMT相关蛋白，癌组织中Vimentin表达显著高于癌旁组织的表达，而癌组织中E-cadherin表达低于癌旁组织，Gls1高表达与肝细胞癌患者血清AFP表达水平及肿瘤分化程度显著相关(p＜0.05)。 结论:Gls1、Vimentin在肝细胞癌肿瘤组织中高表达，而E-cadherin的表达在肝细胞癌中呈低表达趋势。数据统计分析结果显示:Gls1与Vimentin、E-cadherin这三种蛋白之间具有相关性(p＜0.05)，Gls1的表达与肝细胞癌患者血清中AFP的表达正相关，同肿瘤分化恶性程度也具有正相关性。结果显示:Gls1、E-cadherin及Vimentin在肿瘤组织中的表达差异具有判断恶性程度及预后的价值。 第二部分 Gls1表达改变对肝细胞癌细胞侵袭转移能力的影响 目的:探讨Gls1表达改变对肝细胞癌细胞上皮间质转化能力的影响，初步阐明Gls1调控肝细胞癌细胞侵袭转移能力可能的分子机制。 方法:运用SiRNA干扰下调肝细胞癌细胞株Gls1的表达水平，通过划痕试验检测细胞迁移能力变化，利用Western Blot技术进一步探究Gls1表达与肝细胞癌上皮间质转化相关分子之间的相关性。 结果:SiRNA干扰下调肝细胞癌细胞中Gls1表达后，肝细胞癌细胞株MHCC-97L和MHCC-97H的细胞迁移、侵袭能力明显减弱(p＜0.05)，Gls1的表达与间质相关蛋白Vimentin正相关而与上皮相关蛋白E-cadherin负相关。 结论:Gls1在肝细胞癌细胞中的表达与其侵袭迁移能力及Vimentin蛋白量的表达正相关，与E-cadherin蛋白量的表达负相关。