FZD4基因在人皮肤鳞状细胞癌细胞中的表达及功能的初步研究

来源 :北京协和医学院中国医学科学院 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:quanruihongjing
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背景:已有报道及我们前期的皮肤鳞状细胞癌(Cutaneous Squamous Cell Carcinoma,CSCC)全基因组测序研究揭示,FZD4mRNA在CSCC组织中较癌旁组织表达显著降低,且已有报道在宫颈细胞癌、前列腺癌、肺癌及肝癌中通过调节FZD4的表达可直接或间接影响肿瘤细胞的增殖与分化。我们推测FZD4可能通过直接或间接的途径导致Wnt/β-catenin信号失调,从而在CSCC发展过程中扮演重要角色。为此我们运用CSCC细胞系Colo16,沉默及过表达FZD4基因,观察沉默及过表达前、后FZD4基因的mRNA和蛋白表达,并对其功进行初步研究。  目的:研究FZD4基因沉默及过表达前、后在Colo16中的表达情况及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。  方法:Colo16细胞转染siRNA及质粒后,采用qPCR检测FZD4基因mRNA水平变化,Western blot检测FZD4基因蛋白质表达的变化,CCK-8检测细胞增殖能力改变,流式细胞仪检测细胞凋亡水平改变。  结果:Colo16细胞转染siRNA后48h,qPCR结果显示FZD4mRNA显著降低(P<0.05),转染质粒后48h,FZD4mRNA显著增加(P<0.05);Western blot显示转染siRNA后FZD4相关蛋白表达显著降低,转染质粒后FZD4相关蛋白表达显著增加;增殖结果显示,siRNA转染组较阴性对照组及空白组细胞增殖水平无明显升高(P>0.05),质粒转染组增殖水平明显下降(P<0.05),阴性对照组和空白组之间无显著性差异(P>0.05);凋亡结果提示,siRNA转染组与空白组与阴性对照组凋差异无统计学意义(P>0.05),而质粒转染实验组细胞凋亡较阴性对照组及空白组显著增加(P<0.05)。  结论:在Colo16中FZD4过表达可导致细胞增殖能力显著降低,凋亡水平显著上升,提示在CSCC中FZD4低表达可能上调细胞增殖能力、抑制细胞凋亡,进而在CSCC的发生发展中发挥作用。
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