【摘 要】
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蛋白质的磷酸化在生物学过程起着重要的调控作用,故磷酸化蛋白质组学研究具有极其重要的意义。本论文致力于研制新型的磷酸化肽选择性富集材料,以期为磷酸化蛋白质组学研究提供
【出 处】
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中国科学院研究生院 中国科学院大学
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蛋白质的磷酸化在生物学过程起着重要的调控作用,故磷酸化蛋白质组学研究具有极其重要的意义。本论文致力于研制新型的磷酸化肽选择性富集材料,以期为磷酸化蛋白质组学研究提供高重现性、高富集容量、高选择性和高灵敏度的分析手段。
以研制的具有高反应活性的琥珀酰亚胺基团的整体材料为基质,以次氨基三乙酸(NTA)为配体,通过固载Zr4+和Ti4+离子,制备了新型固定化金属离子亲和色谱(IMAC)整体材料。该材料具有制备过程简单、性能稳定和重现性好的优点,并在β-酪蛋白及牛奶酶解产物的磷酸化肽富集中显示了较好的选择性。
采用无污染的沉淀法结合超临界干燥技术,研制了具有高比表面积的介孔ZrO2和TiO2气凝胶材料,并将其成功用于牛奶和鼠肝线粒体磷酸化蛋白质组学研究。该材料对磷酸化肽的富集具有较好的选择性和回收率。与商品化ZrO2和TiO2微米颗粒相比,气凝胶可将对磷酸化肽的富集容量提高一个数量级。与文献报道的金属氧化物介孔材料相比,气凝胶可将磷酸化肽的检测限从fmol降低至30 amol。
以具有高生物兼容性、亲水性和络合能力的三磷酸腺苷(ATP)为配基,通过固载Ti4+离子和Ga3+离子,成功制备了对磷酸化肽具有高选择性的新型磁性IMAC纳米材料。可在5000倍非磷酸化肽存在的情况下,实现对磷酸化肽的高选择性富集,对磷酸化肽的靶上检测限可达3 amol。
利用研制的ATP配基-磁性IMAC纳米材料,结合二甲基化同位素标记技术,对小鼠肝癌腹水瘤高低转移细胞株进行了高通量的磷酸化蛋白质组学定量研究,并筛选出与肿瘤淋巴道转移能力相关的17条差异磷酸化肽段和2条差异磷酸化蛋白质,为揭示肿瘤转移机制提供了技术支撑。
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