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过敏性哮喘是一种由多种炎性细胞参与的气道慢性炎症性疾病,发病机制复杂。中医认为属“哮证”范畴,痰饮在其发生发展过程中占据主导作用。仲景《金匮要略·痰饮咳嗽病脉证并治篇》中提出“病痰饮者,当以温药和之”的治疗痰饮的总则,对痰饮的内治和外治均具有指导意义。本研究通过建立过敏性哮喘动物模型,在温化痰饮原则指导下,运用穴位敷贴这一临床常用且疗效确切的外治手段进行干预,探讨穴位敷贴治疗哮喘的效应机制,希望能为外治法领域的基础研究拓宽一些思路。目的:通过观察以温化痰饮立法的穴位敷贴对过敏性哮喘豚鼠肺组织嗜酸性粒细胞凋亡情况、凋亡相关基因bax和bcl-2表达情况,血清白介素-4和y-干扰素的含量变化以及转录因子T-bet和GATA-3mRNA的表达情况的影响,初步探索穴位敷贴对过敏性哮喘气道炎症的作用机理。方法:将Hartley豚鼠30只随机分为正常组、模型组、穴位敷贴组、非穴位敷贴组、阳性对照组,每组6只。采用卵蛋白腹腔注射致敏后呼吸道吸入激发法制备哮喘豚鼠模型。于造模成功次日给药,穴位敷贴组取肺俞、膻中、定喘穴进行敷贴,敷贴药物选取白芥子、麻黄、细辛、甘遂按一定比例以生姜汁调和,每次敷贴4h,每日1次,连续敷贴10天;阳性对照组以氨茶碱药饼敷贴,取穴部位及敷贴方法同穴位敷贴组;非穴位敷贴组取肺俞、膻中、定喘穴旁开1cm处,敷贴方法同穴位敷贴组;正常组、哮喘模型组不予治疗。治疗结束后对各组豚鼠体重、行为表现进行观察,对肺组织切片进行HE染色观察病理改变;TUNEL法检测肺组织EOS凋亡,免疫组化法检测肺组织凋亡相关基因bax和bcl-2的表达;ELISA法检测血清IL-4和IFN-γ的含量,RT-PCR方法检测转录因子T-bet和GATA-3mRNA的表达情况。所测数据均以均值加减标准差(X±s)表示,采用SPSS18.0统计软件分析数据,组间数据比较采用方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。实验结果1.穴位敷贴对各组豚鼠一般情况及病理学的影响穴位敷贴治疗后,穴位组、非穴位组体重较模型组有不同程度增加,行为学评分较模型组有明显降低。HE染色显示,模型组可见:气道粘膜充血水肿,大量炎性细胞浸润,穴位敷贴组、非穴位敷贴组、阳性对照组与模型组相比,上述改变明显减轻。2.穴位敷贴对哮喘豚鼠EOS凋亡的影响穴位组、非穴位组、阳性对照组EOS计数与模型组相比,均明显下降,三组EOS凋亡指数与模型组相比显著增加(P<0.01);穴位组、非穴位组、阳性对照组bcl-2表达均较模型组下降,各组bax表达均较模型组上升,且统计学差异显著(P<0.01)。3.穴位敷贴对哮喘豚鼠免疫调节机制穴位组、非穴位组、阳性对照组血清IL-4含量较模型组显著下降,穴位组明显低于非穴位组(P<0.01);穴位组、非穴位组、阳性对照组血清IFN-y含量较模型组显著上升,穴位组明显高于非穴位组(P<0.01)。结论1.以温化痰饮治法为指导,运用穴位敷贴治疗过敏性哮喘可以获得较好的疗效。2.穴位敷贴可以改善发作期哮喘豚鼠的症状,减轻气道炎症反应。3.穴位敷贴可以通过上调bax的表达并抑制bcl-2(?)勺表达,达到促进EOS凋亡的目的。4.穴位敷贴能够通过调节转录因子T-bet和GATA-3的表达,从而影响细胞因子IL-4和IFN-y的分泌情况,纠正Thl/Th2失衡状态。