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目的： 利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix Assisted LaserDesorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)技术对金黄色葡萄球菌进行鉴定,以VITEK2 Compact全自动微生物鉴定及药敏系统作为对照,研究MALDI-TOF MS质谱谱图与耐药性的关系,评价MALDI-TOF MS技术用于鉴别金黄色葡萄球菌耐药株和敏感株的可行性。 方法： 摸索MALDI-TOF MS技术对金黄色葡萄球菌进行鉴定和耐药性分析的适宜条件,包括菌株的培养条件、培养时间和前处理方式,并通过同一菌株的重复性检测评价MALDI-TOF MS技术鉴定细菌的重现性。在上述适宜的鉴定条件下,应用MALDI-TOF MS技术对24株临床标本分离的金黄色葡萄球菌及20株食品中分离的野生型金黄色葡萄球菌进行鉴定和分析,同时采用VITEK2 Compact全自动微生物鉴定及药敏系统对上述44株实验菌株进行生化鉴定和药敏实验。最后,将实验菌株的生化反应结果、耐药性结果和质谱图谱进行汇总和聚类分析,研究金黄色葡萄球菌的耐药性与生化反应之间及耐药性与质谱图谱之间的相关性。 结果： MALDI-TOF MS技术进行金黄色葡萄球菌鉴定和耐药性分析的适宜条件为使用哥伦比亚血琼脂+5％绵羊血培养基接种分离,37℃培养18～24h,然后选择蛋白提取的前处理方式对分离菌落进行处理。通过反复性实验证明MADLI-TOFMS技术鉴定金黄色葡萄球菌的稳定性高,重现性较好。 MALDI-TOF MS技术和VITEK2 Compact系统对44株实验菌株的鉴定结果一致,全部为金黄色葡萄球菌,符合率为100％,且与VITEK2 Compact系统相比,MALDI-TOF MS鉴定过程操作更加简便,明显缩短了检测时间。 VITEK2 Compact系统的耐药性分析结果为44株实验菌株中包含15株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)和29株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive Staphylococcus aureus,MSSA)。对实验菌株的生化反应结果与耐药谱进行汇总分析,并未发现两者之间明显的相关性。 对实验菌株的质谱图谱的汇总分析,发现MRSA和MSSA的质谱图谱在2300m/z、3005m/z和3450m/z附近的质谱峰强度(Apex)和出峰阳性率存在明显差异。对三个特征性峰单独鉴别MRSA和MSSA的灵敏度和特异性进行统计,结果为:2301m/z位置的质谱峰对于鉴别MRSA和MSSA的灵敏度和特异性为86.7％和75.9％;3005m/z位置的质谱峰对于鉴别MRSA和MSSA的灵敏度和特异性为80.0％和89.7％;3450m/z位置的质谱峰对于鉴别MRSA和MSSA的灵敏度和特异性为93.3％和75.9％。三个特征性峰两两组合对鉴别MRSA和MSSA的灵敏度和特异性也进行了统计,其中“2301m/z与3450m/z”以“和”关系组合,特异性和灵敏度均较高为89.7％和86.7％。 结论： 1.基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在适宜条件下鉴定金黄色葡萄球菌,准确度高,检测速度快,结果重现性好。 2.可以利用金黄色葡萄球菌MADLI-TOF MS质谱图中的特殊峰及其组合的检出与否有效鉴别MRSA和MSSA,在金黄色葡萄球菌的耐药性分析方面表现出很大的潜力和发展空间。