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番茄（Lycopersicum esculentum Mill.）为茄科（Solanaceae）番茄属的一年生草本植物，因其果实营养丰富、美味可口，已成一种世界性蔬菜。低温一直是限制番茄生长与分布，影响果实品质和产量的重要环境因子。如何提高番茄对低温的耐受性一直是人们关注的焦点。快速发展的植物基因工程技术为改善番茄品种的抗寒性提供了新途径；其中，利用能够促进大量冷调节基因表达的冷应答转录因子基因并辅以强效抗寒基因的策略，是近年来尝试提高植物抗寒性的重要方式。本实验室已将拟南芥的冷应答转录因子基因AtCBF3和主效抗寒基因AtCOR15a分别受RD29A低温诱导启动子控制后导入烟草，使转基因烟草能耐受-1℃～-1.5℃的低温。本研究拟将RD29A-CBF3和RD29A-COR15a双价基因导入番茄基因组，以期得到抗寒的番茄材料，为今后进一步通过分子途径改良番茄的抗寒性奠定基础。番茄的组织培养研究开展得较早，但一直无法摆脱分化率低的问题，而分化率又受到番茄品种基因型，外植体类型和生理状态，外源激素种类和组合浓度，培养环境等诸多条件的限制和影响。因此能否综合系统地考虑各种条件因子的影响，建立高效稳定的番茄再生体系是番茄遗传转化应用的关键问题之一。同时，影响遗传转化率的因素也很多，如植物基因型、外植体类型、农杆菌菌液浓度和侵染时间、预培养和共培养时间、抗性选择抗生素浓度等。如何提高转化率，建立高效、稳定的遗传转化系统，仍是今后研究的重要课题。本实验在优化番茄高效再生体系和遗传转化体系的基础上，采用农杆菌介导的方法将RD29A-CBF3和RD29A-COR15a双价基因导入番茄。主要实验内容和结果如下：1．以番茄高代自交系为材料，从外源激素浓度和外植体类型等方面优化了番茄再生体系。试验结果表明：浸种、暗培养对番茄种子发芽有益，能获得比较整齐的番茄幼苗；不同的激素浓度配比对番茄外植体不定芽再生有不同的影响：以MS+6-BA 1.0mg/L+IAA 0.1mg/L+3％蔗糖+0.7％琼脂（pH5.8）对子叶、MS+6-BA 0.8mg/L+IAA 0.1mg/L+3％蔗糖+0.7％琼脂（pH5.8）对下胚轴和MS+6-BA 1mg/L+IAA 0.2mg/L+3％蔗糖+0.7％琼脂（pH5.8）对真叶、茎段的作用效果比较显著；子叶再生效果优于下胚轴、真叶、茎段；生根培养基以MS+IAA0.5mg/L+3％蔗糖（pH5.8）比较合理。2．从外植体类型、农杆菌菌液浸染时间、预培养和共培养时间、抗性选择抗生素浓度五个方面对番茄遗传转化体系进行了比较系统的优化，结果证明：预培养2d、农杆菌侵染时间8min和共培养2d的转化操作的效果比较理想；子叶为60mg/L的Kan，下胚轴、真叶和茎段为70mg/L的Kan是适宜的抗性选择浓度。3．通过农杆菌介导的遗传转化将RD29A-CBF3和RD29A-COR15a双价基因导入番茄，对卡那霉素抗性植株进行PCR检测，能扩增出预期的目的带，初步证实目的基因已整合到番茄染色体基因组中。