HO-1保护人血管内皮细胞抗凋亡作用的研究

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本实验的目的是研究HO-1在保护细胞凋亡中的作用,探讨其产生保护作用的机理。实验中将克隆了HO-1基因的质粒pcDNA3HO-1用DOTAP包裹转入人血管内皮细胞(HUVEC)中进行表达。质粒表达一段时间后采用TNF-α诱导细胞凋亡,以流式细胞仪测定细胞凋亡率。 在质粒转染进细胞后,用细胞裂解液破碎细胞, SDS-PAGE鉴定表达量。通过设置质粒转染的时间梯度和浓度梯度,找出质粒表达的最佳条件。再通过在各个条件下细胞凋亡率的对比,证明HO-1抗凋亡的能力。在未用任何刺激剂的条件下,未转染进HO-1cDNA的细胞的凋亡率是转染进的5-23倍。采用用Hemin 和SnPP分别刺激细胞,促进和抑止HO-1在细胞中的表达。实验结果显示经Hemin处理过的细胞的凋亡率均在20%以下,而SnPP处理过的细胞的凋亡率大幅的上升,最高可达到95%以上。整个数据显示HO-1的表达被抑止时细胞的凋亡率是HO-1的表达被诱导时的5-20倍左右。实验证明细胞的凋亡率与质粒的转染效率成反比,HO-1对细胞有保护作用,可以抑制细胞凋亡,在临床上有广泛的应用前景。
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