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本研究一共选了四种蛋白进行了纯化、结晶，分别是酿酒酵母酒精耐受因子Asrlp蛋白，来源于嗜热革节孢Scytalidium thermophilum YM54的高温蛋白酶，以及来源于Bacillus sp.B16的两种具有杀线虫活性的蛋白酶(碱性丝氨酸蛋白酶和中性金属蛋白酶)。
对于Asrlp蛋白，我们采用原核异源表达系统，表达提取并纯化该蛋白，由于该蛋白表达为包涵体，因此需要在提取纯化过程中进行变复性操作，再进一步筛选结晶条件。
对于高温蛋白酶和另外两种具有杀线虫活性的蛋白酶，我们采用从大量的原始发酵液中提取蛋白酶，以保持该酶的原有活性和结构。经过不同的纯化方法，最终得到适于结晶用的纯蛋白酶，并筛选其结晶条件。
主要研究结果为：
1、酿酒酵母酒精耐受因子Asrlp的基因克隆、表达和纯化
从酿酒酵母基因组中成功克隆到序列正确的、大小为867bp的Asrlp基因，并构建了以pET30a、pET32a、pGEX4T-1三个质粒为载体的表达重组质粒，转入大肠杆菌表达宿主E.coliBL21进行表达，经验证三个重组质粒均有表达，但均为包涵体。我们以pET30a-Asrlp重组质粒进行进一步的实验，经过变复性处理后，我们成功纯化了该蛋白，该蛋白大小约为35KD。将其浓缩到15mg/ml浓度，进行结晶条件的筛选，目前没有得到蛋白晶体的生长的条件。
2、嗜热革节孢Scytalidium thermophilum YM54的高温蛋白酶，以及来源于Bacillus sp.B16的两种蛋白酶的纯化与结晶
我们从大量发酵中通过硫酸铵分级沉淀，不同层析柱进行分步纯化，最终得到适用于结晶，具有活性的纯蛋白酶。浓缩后用于结晶条件的筛选，浓缩后测定其蛋白浓度分别为8mg/ml、10mg/ml、10mg/ml。结果碱性蛋白酶得到了两个结晶条件，中性金属蛋白酶得到了四个结晶条件。