【摘 要】
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目的为研究第三代复制依赖性腺病毒载体应用于慢性疼痛基因治疗的可行性，构建第三代腺病毒生产体系中的辅助性腺病毒以及表达Cre重组酶的真核表达载体，并对Cre切除辅助病毒包装
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目的为研究第三代复制依赖性腺病毒载体应用于慢性疼痛基因治疗的可行性，构建第三代腺病毒生产体系中的辅助性腺病毒以及表达Cre重组酶的真核表达载体，并对Cre切除辅助病毒包装信号的有效性进行分析。方法以重叠延伸PCR及酶切连接的方法将同向的两个loxP位点和绿色荧光蛋白表达盒依次克隆入pShuttle穿梭载体质粒，按照AdEasyTM系统的标准实验方法进行辅助病毒的生产和扩增。同时构建pcDNA3.1(+)-cre真核表达载体，脂质体转染HEK293细胞，通过PCR和流式细胞术分析细胞内表达的Cre重组酶对其后感染的辅助病毒包装信号的切除作用。结果构建的辅助性腺病毒能够在HEK293细胞内包装和扩增，其包装信号可以被细胞内表达的Cre酶有效切除。结论成功构建了辅助性腺病毒和pcDNA3.1(+)-cre真核表达载体，为第三代腺病毒的生产和慢性疼痛基因治疗的研究奠定了实验基础。
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