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目的:食管癌是世界上第七大致死性癌症。中国为世界上食管癌的主要发生国家之一，其发生率与日俱增。RAF家族蛋白的激活加速了肿瘤的转移和增殖，在癌症的发生和发展中起到重要作用。在前期研究中，我们课题组发现从藤黄属植物中提取得到的化合物有多种抗癌活性。在转移性食管癌细胞上针对RAF蛋白的筛选结果显示，化合物Griffipavixanthone(GPX)可以下调B-RAF和C-RAF蛋白。本实验的目的旨在探究从山木瓜中提取得到的化合物GPX抑制食管癌的转移和增殖的活性及其作用机制。 方法:1、采用western blot方法筛选藤黄属植物化合物库中抑制转移性食管癌细胞中RAF蛋白的化合物。2、采用划痕、小室迁移和侵袭实验探究GPX在体外对食管癌细胞转移的作用。3、采用克隆形成和流式的方法探究GPX对细胞增殖和细胞周期的作用。4、建立小鼠肺转移模型并腹腔注射给药GPX，确认该化合物在动物体内抑制食管癌转移和增殖的效果。5、采用western blot方法检测GPX对食管癌细胞中RAS-RAF-MEK-ERK级联蛋白和cyclinB1蛋白的作用。6、在食管癌细胞株中，用western blot方法检测GPX对AKT和上皮间质转化(EMT)信号通路的作用。7、采用RT-PCR方法检测GPX作用下B-RAF、C-RAF和MMP-2的mRNA变化。 结果:1、在转移性食管癌细胞中，化合物GPX可以抑制B-RAF和C-RAF蛋白的表达，并在食管癌细胞株TE1、KYSE150和Eca109，人正常肝组织细胞HL7702中未表现显著的细胞毒性。2、在食管癌TE1和KYSE150细胞中，GPX作用后可以使食管癌划痕愈合减慢，小室迁移和侵袭细胞数目减少。说明GPX在体外可以抑制食管癌细胞爬行、迁移和侵袭，从而起到抑制转移的作用。3、GPX10μM作用48 h后，能够显著减少食管癌克隆形成数量。48 h时，GPX10、15、20μM作用下可以诱导细胞G2/M周期阻滞。说明GPX在体外可以抑制食管癌的增殖并诱导细胞周期阻滞。4、建立尾静脉注射的动物模型后，腹腔注射GPX（隔天给药，20 mg/kg）和5-FU(隔天给药，20 mg/kg)，可以显著减少肺转移肿瘤结节面积、数量，并降低肺重。免疫组化检测结果显示，GPX给药组的肺结节中磷酸化ERK和Ki-67蛋白降低，TUNEL没有明显变化。说明GPX可以显著减少小鼠体内食管癌肺转移和肿瘤增殖。5、GPX可以抑制细胞内B-RAF、C-RAF、p-MEK、p-ERK和cyclin B1的蛋白表达，并且呈现浓度梯度和时间梯度依赖。6、GPX可以通过抑制p-AKT、vimentin和snail蛋白，从而调节AKT和上皮间质转化(EMT)。7、GPX能够降低食管癌细胞中B-RAF、C-RAF和MMP-2的mRNA表达，说明GPX可以通过B-RAF和C-RAF的转录水平下调B-RAF和C-RAF的蛋白表达，能够通过调节MMP-2，起到抑制食管癌侵袭、转移的作用。 结论:GPX主要通过下调RAS-RAF-MAPK、AKT和EMT信号通路，在体内和体外起到抑制食管癌转移和增殖的作用。