【摘 要】
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结核病是人类主要的传染性疾病之一,全球每年新发结核病人数超过800万,死亡人数约300万,全世界结核杆菌感染人数超过1/3。研究发现目前广泛使用的预防结核病的疫苗--卡介苗(B
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结核病是人类主要的传染性疾病之一,全球每年新发结核病人数超过800万,死亡人数约300万,全世界结核杆菌感染人数超过1/3。研究发现目前广泛使用的预防结核病的疫苗--卡介苗(BCG)中仍存在有多种毒力基因,导致其对人类的保护作用不稳定,给免疫功能缺陷者(如HIV患者)接种卡介苗可能引起严重的播散性结核病。
ERP又称P36、Pirg或Rv3810,是结核分枝杆菌的一种重要毒力因子,它不仅存在于有毒的结核分枝杆菌中,也存在于卡介苗中。鉴于它又是一种免疫显性蛋白,因此,敲除ERP基因后,将可能大大提高卡介苗使用的安全性,但是否会降低卡介苗的免疫效力有待研究。
目的：通过分别用卡介苗ERP基因缺失突变株、卡介苗(BCG)及生理盐水免疫小鼠,观察免疫后小鼠脾脏淋巴细胞增殖转化率、淋巴细胞培养上清液IL-2、IFN-γ的产量及血浆IgG的滴度变化并进行比较,探讨卡介苗ERP基因缺失突变株对小鼠细胞及体液免疫应答的影响,明确敲除ERP基因后是否影响卡介苗的免疫效力。
方法：72只雌性Balb/c小鼠随机分为3组：卡介苗ERP基因缺失突变株组、卡介苗(BCG)组及生理盐水组,每组24只,分别用卡介苗ERP基因缺失突变株、卡介苗(BCG)及生理盐水进行小鼠背部皮下免疫接种,并分别丁免疫后4、8、12、16周后,各组随机抽取6只小鼠：1.分离脾脏淋巴细胞,分别采用CCK-8检测脾脏淋巴细胞增殖转化率,双抗体夹心ELISA法检测淋巴细胞培养上清液IL-2、IFN-γ的产量。2.摘眼球取血,分离血浆,用间接ELISA检测Balb/c小鼠血浆受到PPD刺激后IgG的滴度。
结果：
1.卡介苗ERP基因缺失突变株组与卡介苗组脾淋巴细胞的增殖能力及培养上清液中IL-2、IFN-γ的分泌量均明显高于生理盐水对照组,卡介苗ERP基因缺失突变株组与卡介苗组之间无明显差别。免疫8周后,卡介苗ERP基因缺失突变株组与卡介苗组脾淋巴细胞的增殖能力及培养上清液中IL-2、IFN-γ的分泌量达高峰,均明显高于4周,而随着时间的延长免疫效果呈递减趋势。
2.卡介苗ERP基因缺失突变株组与卡介苗组血浆IgG的滴度均明显高于生理盐水对照组,卡介苗ERP基因缺失突变株组与卡介苗组之间无明显差别。免疫8周后,卡介苗ERP基因缺失突变株组与卡介苗组血浆IgG的滴度达高峰,均明显高于4周,而随着时间的延长免疫效果呈递减趋势。
结论：卡介苗ERP基因缺失突变株可诱导小鼠产生一定强度的特异性细胞免疫及体液免疫,并且其诱导小鼠产生的免疫效力与卡介苗相当,为新型结核减毒活疫苗的研制奠定了有益的基础。
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