黑龙江省部分牧场奶牛和羊隐孢子虫感染情况及分离株的分离鉴定

• 作 者: 刘爱芹
• 机 构: 哈尔滨医科大学
• 出 处: 哈尔滨医科大学
• 发表日期: 2009年期
• 关键词: 隐孢子虫 传播途径 抗酸染色法 同源性分析 动物感染率 公共卫生

目的:通过对黑龙江省部分牧场奶牛、绵羊和山羊隐孢子虫感染情况的调查，明确本地区奶牛、绵羊和山羊隐孢子虫的感染率:对本地区隐孢子虫分离株进行分子鉴定，研究虫株的分布，推测传染源，为研究隐孢子虫在人和动物之间的传播途径提供直接的实验依据；明确本地区部分动物体内隐孢子虫的优势虫种和基因型及人兽共患的虫种和基因型，这将有助于我们将来制定本地区隐孢子虫病的预防和控制措施和策略。　　
方法:用饱和蔗糖溶液漂浮法和福尔马林乙酸乙酯沉淀-改良抗酸染色法对收集的粪便样本进行浓集和染色，获得隐孢子虫阳性样本。用MagExtractor-Genome试剂盒提取纯化的隐孢子虫卵囊的基因组DNA，对18SrRNA基因、HSP70基因和actin基因进行巢式PCR及RFLP，通过序列分析确定隐孢子虫的虫种和基因型，并进行种系发育分析及同源性分析。　　
结果:1.在6个奶牛场中有5个检出隐孢子虫卵囊(83.3%)。在507份奶牛粪便样本中，共获得27个隐孢子虫分离株，感染率为5.33%。对其18SrRNA基因、HSP70基因和actin基因PCR-RFLP及测序，鉴定出26个安氏隐孢子虫(Cryptospor idium andersoni)分离株和1个Cryptospor idium ryanae分离株。2.在8个绵羊场中有4个检出隐孢子虫卵囊(50%)。感染率高峰在1个月龄以下的羔羊中(20%)，且感染率随着年龄增长而降低。在396份粪便样本中，共获得9个隐孢子虫分离株，感染率2.27%。对18SrRNA基因进行PCR-RFLP及测序，确定6个分离株为隐孢子虫鹿基因型Cryptosporidiumcervine genotype)；1个分离株为牛隐孢子虫(Cryptosporidium bovis)；2个分离株为安氏隐孢子虫。3.在5个山羊场中有3个检出隐孢子虫卵囊(60%)。年龄在1年以上的山羊体内没有发现隐孢子虫的感染。在241份粪便样本中，共获得8个隐孢子虫分离株，感染率为3.3%。经18SrRNA基因PCR-RFLP及测序，确定7个分离株为隐孢子虫鹿基因型。　　
结论:首次对黑龙江省的奶牛、绵羊和山羊进行了隐孢子虫感染情况的调查，隐孢子虫在这些动物中的感染率相对较低；安氏隐孢子虫是黑龙江省感染奶牛的优势隐孢子虫虫种；隐孢子虫鹿基因型是黑龙江省绵羊、山羊体内的优势隐孢子虫虫种。黑龙江省反刍家畜中隐孢子虫鹿基因型感染普遍，其具有公共卫生重要性。