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1研究背景糖尿病作为一种常见的慢性疾病,其发病人数逐年增加。截止到目前,全球已经有大约2.5亿人口罹患该疾病。而到2025年,这一人数可能将达到4亿左右。世界卫生组织(World Health Organisation,简称WHO)预测,相比发达国家,发展中国家人群患糖尿病的人数将会上升更快,这与其不健康饮食、老龄化、肥胖等诸多因素有关。世界卫生组织做出统计显示,2015年,发展中国家患糖尿病的人群年龄大多数集中在35-65岁左右,这正是一个人工作生产的黄金时段;而发达国家患糖尿病年龄则集中在65岁左右。2016年,世界卫生日的主题是“应对糖尿病,我们需要更多的行动”。从以上数据我们可以看出,全人类必须开始更加重视糖尿病。一方面,我们需要重视糖尿病带来的各种机体损害,比如各种并发症的产生,如周围神经病变,自主神经病变,视网膜病变,心血管危害等等,另一方面我们要加强糖尿病患者的健康教育,宣扬糖尿病的相关知识,在糖尿病的高危人群中深入开展相关知识的讲解。总之,糖尿病的防治刻不容缓。糖尿病发病因素多,可由遗传、免疫、微生物及其毒素、自由基、精神因素等等各种原因作用于机体,进而导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗,由于胰岛素分泌相对或绝对不足、或胰岛素作用缺陷,而引发机体糖、脂肪和电解质等一系列代谢紊乱综合征,临床上以高血糖为主要特点,而持久升高的血糖、血脂一方面会对机体造成损伤,还会诱发β细胞的功能损坏和诱发胰岛素抵抗,这些都与氧化应激和慢性炎症密切相关,可以说,氧化应激贯穿糖尿病的发生、发展。CTRP9作为近些年发现的一个脂肪细胞因子,它的家族一共有十五个成员,结构大致相似,具有正性作用,它在预防氧化应激、胰岛素抵抗、心血管疾病的发生等方面发挥着不可忽视的作用。已有证据显示,CTRPs家族中,特别是CTRP9和APN具有非常相似的结构,它们的生物学特点也有相同点。有学者发现,对小鼠进行APN基因消除,小鼠并未出现代谢紊乱的表现,这说明,可能体内有其他因素或者机制来代偿性的弥补APN的缺乏。这种作用,有可能是通过CTRPs来代偿性实现的。由于CTRPs家族与APN结构和生物学特点的相似性,有学者推测,CTRP9参与了上述的代偿机制。进一步阐明CTRP9的生理学效应,探索其与心血管疾病、肥胖、糖尿病之间的联系,可以为慢性代谢性疾病的治疗提供新的思路和方法。二甲双胍作为治疗糖尿病的一线用药之一,通常认为它通过以下三个途径达到降糖目的:1、延缓胃肠道对葡萄糖的吸收;2、增加组织对胰岛素的敏感性;3、抑制肝糖原异生作用,降低肝糖输出。近些年来,二甲双胍的一些其他作用也被越来越被人们所熟知,比如抗炎、抗肿瘤、抗氧化应激等,但是对于其抗氧化应激的作用机制,尚缺乏临床实验和基础实验的支持。2材料和方法2.1分组及饲喂方法SPF级SD雄性大鼠40只,体重为89.62±7.42g。适应性喂养7天后,随机分为2组,一组10只,一组30只,分别饲喂普通饲料、高脂高糖饮食,在第8周时腹腔注射STZ,使用STZ+高脂高糖联合造模,以30mg/kg腹腔注射造模,3天后测空腹血糖,将空腹血糖大于15mmol/L视作为造模成功。将造模组随机分为3组,每组10只,一组继续饲喂高脂高糖(M组),一组饲喂高脂高糖+二甲双胍(M+MET组),一组饲喂高脂高糖+胰岛素(M+INS);普通饲料组喂普通饲养(C组,10只)。MET按200mg/Kg剂量灌胃,不给予MET的大鼠使用生理盐水灌胃。共喂养12周。2.2观察指标(1)血标本用于检测血糖浓度(葡萄糖氧化酶法)及胰岛素含量(放射免疫法),以此计算胰岛素抵抗指数(2)ELISA法检测血清中CTRP9、TNF-α的表达水平(3)Western blot法检测IKK-β及ser181蛋白表达的表达水平(4)RT-PCR法检测CTRP9、TNF-α、IL-6基因的表达水平3结果3.1 HOMA-IR各组大鼠血清HOMA-IR水平之间的差异有统计学意义(F=169.923,P=0.000<0.05)。M组、M+Ins组和M+Met组的HOMA-IR均比Control组高,差异有统计学意义(P<0.05)。M+Ins组、M+Met组的HOMA-IR均比M组低,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3.1、3.2。3.2血清CTRP9的表达水平各组大鼠骨骼肌组织平均CTRP9水平之间的差别有统计学意义(F=98.773,P=0.000<0.05)。进一步两两比较,M+Ins组、M+Met组的CTRP9水平均高于M组,差异有统计学意义(P<0.05)。M+Ins组、M+Met组的CTRP9水平均低于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3.3、3.4。3.3大鼠HOMA-IR与CTPR9水平的相关性分析M组,HOMA-IR与血清CTRP9水平呈负相关,r=-0.418,P=0.019<0.05;M+MET组,HOMA-IR与血清CTRP9水平呈负相关,r=-0.306,P=0.022<0.05。见图3.2。3.4各组大鼠骨骼肌组织CTRP9、TNF-α、IL-6基因的表达水平与C组比较,M组大鼠脂肪细胞CTRP9 mRNA表达水平显著降低,有统计学意义(P<0.05);与M组比较,M+Ins组、M+Met组CTRP9 mRNA表达水平显著升高,有统计学意义(P<0.05);与C组比较,M组大鼠骨骼肌TNF-αmRNA表达水平显著下降,有统计学意义;与M组比较,M+Ins组、M+Met组TNF-αmRNA表达水平显著升高,有统计学意义(P<0.05)。与C组比较,M组大鼠骨骼肌IL-6 mRNA表达水平显著下降,有统计学意义;与M组比较,M+Ins组、M+Met组IL-6 mRNA表达水平显著升高,有统计学意义。3.5各组大鼠骨骼肌组织IKK-β、ser181蛋白的表达4结论(1)2型糖尿病大鼠血清中CTRP9表达水平降低。(2)2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗与CTRP9的表达呈负相关。(3)二甲双胍降低糖尿病大鼠骨骼肌组织ser181蛋白的表达,对IKK-β影响不大。(4)二甲双胍的上述作用有可能是通过抑制IKK-β的磷酸化实现的。