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癌症对人类危害极大，基于天然产物的抗肿瘤新药研发一直是近年来研究的热点，石斛为我国传统名贵中药材，含有多种活性抑癌成分，其抗肿瘤特性受到广泛关注。本文第二部分探究了鼓槌石斛毛兰素对HepG-2细胞增殖活性、凋亡率的影响，以及其可能机理。采用MTT法探究了毛兰素对HepG-2细胞存活率的影响，Hoechst33342探针标记后观察细胞变化，AnnexinⅤ-FITC/PI探针标记后检测细胞凋亡率，采用流式细胞术检测钙离子浓度、细胞周期变化、胞内活性氧浓度及线粒体膜电位，同时为探明鼓槌石斛毛兰素经由何种方式诱导细胞凋亡，Western blot检测了凋亡相关蛋白Caspase-3，Caspase-8，Caspase-9，Fas，FasL，P53，Bcl-2，Bax，Survivin表达变化量。同时为探讨活性氧与Ca2+在毛兰素介导下的HepG-2细胞凋亡中作用，Ca2+螯合剂BAPTA-AM，ROS抑制剂NAC作用细胞后分析细胞凋亡率变化。同时为探讨不同种类石斛是否具有广谱抗癌活性，实验第三部分研究了金钗石斛脂溶性生物碱对HT-29细胞增殖、凋亡的影响，以及其可能机理。运用MTT法检测了金钗石斛脂溶性生物碱对HT-29癌细胞增殖的影响，Hoechst33342染色观察细胞形态学改变，探针标记后使用流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位及周期，同时为探明脂溶性生物碱诱导HT-29细胞凋亡的机理，Western blot检测了凋亡相关蛋白如Caspase-3，Caspase-9，Cyt-c表达变化量。 结果如下: (1) MTT实验结果表明鼓槌石斛毛兰素能显著抑制HepG-2细胞增殖，并呈时间浓度依赖性，经毛兰素培养HepG-2细胞48h后，细胞存活率由82.5±5.33％下降至21.28±3.19％。同时发现HepG-2细胞形态出现漂浮、皱缩、胞间空隙变大、由原来的不规则形状开始变圆等变化。Hoechst33342染色镜下观察发现细胞染色质浓缩、细胞核破碎、凋亡小体出现，表明毛兰素诱导细胞凋亡。流式细胞仪检测发现毛兰素使细胞周期阻滞于G2/M期，毛兰素处理细胞48h后晚期凋亡率分别为4.32±0.22％、9.78±1.38％、20.42±0.93％。同时发现毛兰素能上调胞内钙离子浓度及活性氧浓度并同时降低线粒体膜电位。Western blot检测结果表明鼓槌石斛毛兰素能上调激活型Caspase-3，Caspase-8，Caspase-9蛋白表达，上调 Bax/Bcl-2比例，毛兰素上调Fas，FasL，P53表达，降低了抗凋亡蛋白Survivin的表达，经BAPTA-AM和NAC培养后，细胞凋亡率均出现不同程度下降。 (2)金钗石斛脂溶性生物碱使HT-29细胞存活率明显下降，呈剂量和时间效应，经脂溶性生物碱处理48h后存活率由91.49±1.69％下降至28.19±1.17％，表明HT-29细胞增殖活力降低。Hoechst33342实验可观察到典型细胞凋亡形态学特征，如染色质浓缩、胞核碎裂等。金钗石斛脂溶性生物碱使细胞发生G2期阻滞，AnnexinⅤ-FITC/PI实验测得数据表明脂溶性生物碱能提高HT-29细胞凋亡率，经1.6 mg/ml脂溶性生物碱处理后凋亡率为33.34±0.38％，空白对照组为7.11±0.27％。金钗石斛脂溶性生物碱通过降低线粒体膜电位，上调激活型Caspase-9，3与胞内Cyt-c表达的方式调控细胞凋亡。 结论: (1)鼓槌石斛毛兰素能使HepG-2细胞凋亡，其凋亡诱导性可能与G2/M期阻滞和提高细胞凋亡率有关，其激活的线粒体凋亡途径是在ROS和Ca2+调控下完成的，死亡受体通路也在鼓槌石斛毛兰素调控下完成的HepG-2细胞凋亡进程中发挥作用。 (2)金钗石斛脂溶性生物碱抑制HT-29细胞增殖并通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡，金钗石斛脂溶性生物碱在结肠癌的治疗中具有良好的应用前景。