长链非编码RNA GK-IT1与胃腺癌相关性的研究和分析

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目的:胃癌仍然是世界上高死亡率的疾病之一,特别是东亚地区主要包括中国,胃癌的死亡率居世界之首。而现有的肿瘤相关蛋白表达的检测方法通常因为敏感性较低,因此在临床中的应用价值也有限。最近的研究发现长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)与多种癌症密切相关,在各种不同的肿瘤中常存在着表达失调,它们的表达水平可能是癌症诊断、转移或患者预后的标志物。本研究首先通过 lncRNA芯片测定,获得胃腺癌相关lncRNA的差异表达谱,并从中选取高表达的目标靶基因lncRNA GK-IT1作为研究对象,初步揭示其是否与胃腺癌相关,探究其作为胃腺癌诊断和预后标志物及治疗靶标的可能性。  方法:  1.利用lncRNA表达谱芯片技术,获得胃腺癌相关lncRNA差异表达图谱。  2.采用实时定量逆转录-聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术验证127例胃腺癌患者的胃癌组织和癌旁组织lncRNA GK-IT1的表达水平。  3.分析胃腺癌患者的癌组织和癌旁组织中lncRNA GK-IT1表达水平的差异,确定lncRNA GK-IT1与胃腺癌患者临床病理因素的相关性及与胃腺癌常用的免疫组化测定的标志物的相关性。  4.MTT法和细胞划痕损伤实验检测lncRNA GK-IT1下调表达对胃腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响。  结果:  1.成功获得了胃腺癌相关lncRNA差异表达谱,我们共发现了有3000多种lncRNA在胃腺癌组织和癌旁组织中表达差异具有统计学意义,其中上调倍数超过3倍的有449种,下调倍数超过3倍的有700种。  2.qRT-PCR验证结果表明lncRNA GK-IT1在胃腺癌细胞中过表达,与基因芯片结果一致,其过表达率为70%(89/127),P<0.005,差异具有统计学意义。  3.胃腺癌组织中lncRNA GK-IT1的表达水平与患者肿瘤大小、侵袭深度以及神经管侵袭有关(P<0.05);并与胃腺癌组织组化标志物VEGF和Ki67相关;但与患者的年龄、性别,肿瘤位置等无关(P>0.05)。  4.转染lncRNA GK-IT1 siRNA1,siRNA2和siRNA3均可有效地抑制lncRNA GK-IT1的表达,MTT检测结果表明:lncRNA GK-IT1表达下调对体外胃腺癌细胞的增殖有明显抑制作用,P<0.05;细胞划痕损伤实验结果表明:lncRNA GK-IT1表达下调对胃腺癌细胞的迁移有明显抑制作用,P<0.0001。  结论:本研究的结果证实了胃腺癌组织中存在着lncRNA的异常表达,其lncRNA的表达谱明显不同于配对的癌旁正常组织;lncRNA GK-IT1在胃腺癌组织和胃腺癌细胞中均过表达,其在胃腺癌组织中的表达水平与胃癌的大小、病理分期和神经侵袭密切相关,并且与患者的胃腺癌组织组化标志物VEGF、Ki67相关,但与患者的年龄、性别,肿瘤位置等都无关;lncRNA GK-IT1表达下调对胃腺癌细胞的增殖和迁移有明显的抑制作用。初步结果显示:lncRNA GK-IT1可作为胃腺癌诊断及预测胃腺癌预后的新的潜在的分子标志物。
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