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目的:本实验拟采用高分子材料为成膜材料,包裹惰性气体制备载质粒DNA的超声微泡造影剂,并对微泡进行靶向修饰,为乳腺癌靶向基因治疗提供一种高稳定性的超声微泡治疗方法,同时为基因转染提供一种新型的非病毒载体。方法:1.采用免疫荧光法鉴定三种不同乳腺癌细胞株BT474、SK-BR-3、MDA-MB-231细胞表面HER-2抗原的表达情况;采用碱裂解法抽提前期实验成功构建的重组质粒pGPU6/GFP/Neo-survivin,并检测纯度及浓度;用X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent体外转染乳腺癌细胞,比较不同乳腺癌细胞株基因转染效率。2.阳离子脂质DC-Chol与质粒DNA溶液按照+/-电荷比5:1,2:1,1:1,1:2,1:5混合,制备具有不同+/-电荷比例的DC-Chol/DNA复合物,琼脂糖凝胶电泳阻滞试验检测不同电荷比时DC-Chol包裹质粒DNA的能力。3.选取mPEG-PLLA及DC-Chol做为微泡外壳材料,采用单乳化法制备包裹气态全氟戊烷的高分子微泡,利用静电作用将碘化丙啶(PI)标记的质粒DNA连接到微泡上,观察微泡的形态、密度、粒径、分布范围及与质粒DNA的连接情况。4.合成成膜材料PLGA-PEG-COOH,并选取mPEG-PLLA、PLGA-PEG-COOH及DC-Chol做为微泡外壳材料,采用单乳化法制备包裹气态全氟戊烷的高分子微泡,利用静电作用将PI标记的质粒DNA连接到微泡上,并采用碳二亚胺法活化微泡上的羧基,与Herceptin抗体偶联,观察微泡的形态、密度、粒径、分布范围,并分析微泡与质粒DNA及靶向抗体同时连接率,及其与HER-2(+)乳腺癌BT474细胞的特异性结合能力。结果:1.免疫荧光法鉴定结果显示,乳腺癌BT474细胞可与生物素化的Herceptin结合于细胞表面发出绿色荧光,且荧光强度最高,SK-BR-3细胞次之,而MDA-MB-231细胞及PBS阴性对照均未见荧光;提取的重组质粒DNA纯度高,符合基因转染要求;X-treme GENE HP DNA Transfection Reagent体外转染BT474、SK-BR-3、MDA-MB-231细胞后,BT474细胞转染率最高,MDA-MB-231细胞次之,而SK-BR-3细胞最低,三种细胞绿色荧光强度均随时间延长呈增高趋势。2.当DC-Chol/DNA复合物电荷比为2:1时,质粒DNA在琼脂糖凝胶上呈现完全阻滞;当电荷比为1:1时,泳道上开始出现DNA条带,并且随着电荷比减小,泳道上DNA条带越明显。3.采用单乳化法制备的载质粒DNA高分子超声微泡造影剂分散良好,平均粒径为(3.2±1.2)μm,密度为4.23×108/ml;荧光显微镜观察,微泡表面均带有红色荧光(DNA-PI),表明载基因高分子超声微泡构建成功。4.PLGA-PEG-COOH经核磁共振波谱特征分析,证实合成成功;采用单乳化法制备的载基因靶向HER-2抗原的高分子微泡形态完整,平均粒径为(3.0±1.5)μm,密度为8.8×107/ml,碳二亚胺法活化羧基后与抗体偶联,荧光显微镜观察微泡表面均带绿色荧光,未活化组未见绿色荧光,表明抗体与高分子超声微泡连接成功;流式细胞仪检测同时表达IgG-FITC绿色荧光及PI红色荧光的微泡比例为96.28%,且制备的载基因靶向微泡可与HER-2(+)的细胞特异性结合。结论:1.乳腺癌BT474细胞株表面HER-2抗原表达量最多且体外转染率最高,是进行超声介导载基因靶向HER-2抗原高分子微泡递送系统体外细胞转染的较理想的研究对象。2.以mPEG-PLLA、PLGA-PEG-COOH及DC-Chol为成膜材料成功制备出包裹气态全氟戊烷的载基因靶向HER-2抗原的高分子超声微泡造影剂,且稳定性高,在体外可与HER-2(+)的人乳腺癌BT474细胞特异性结合,为下一步乳腺癌基因治疗提供了一种新型的基因载体。