论文部分内容阅读
目的:本研究采用体外合成mRNA技术,设计并体外转录合成稳定表达JSRV-env mRNA和FGF21 mRNA;利用体外合成JSRV-env mRNA免疫小鼠产生特异性抗体,揭示体外合成mRNA在感染性疾病中的治疗潜力,探索肺腺癌的发病因素,为进一步预防我国呼吸道传染病奠定体外实验基础;检测体外合成FGF21mRNA对胰岛素抵抗模型肝细胞的葡萄糖代谢的影响,为进一步研究FGF21改善胰岛素抵抗降血糖的机制奠定基础,为T2DM的治疗探讨新方法。方法:优化PT7TS载体序列,插入目的序列经电泳测序验证后,体外转录合成JSRV-env mRNA,将体外合成mRNA与鱼精蛋白结合后皮下注射免疫BALB/c小鼠;利用慢病毒包装系统制作JSRV假病毒,取免疫小鼠血清进行假病毒为基础的抗体中和试验,检测小鼠体内针对JSRV-env mRNA的特异性抗体。体外合成GFP荧光标记的FGF21 mRNA;将肝细胞细胞置于含34.4μmol/L重组胰岛素和1μmol/L地塞米松10%FBS RPMI-1640培养基中培养72 h,诱导建立胰岛素抵抗(IR))肝细胞模型;建立IR模型对照组、IR胰岛素组、IR FGF21组、IR胰岛素+FGF21组;利用葡萄糖氧化酶(GOD-POD)法试剂盒测定四组细胞葡萄糖吸收量,实时荧光定量PCR检测细胞GLUT1 mRNA表达的影响,Western blot检测细胞GLUT1的蛋白表达水平。结果:成功体外合成具有稳定性的JSRV-env mRNA和FGF21 mRNA;重组了具有感染能力JSRV假病毒,假病毒体外中和试验检测出JSRV-env mRNA免疫小鼠体内产生针对JSRV的特异性抗体。IR状态下肝细胞转染FGF21后,葡萄糖吸收量与IR对照组相比上升(P<0.05),并与胰岛素产生协同作用,细胞的GLUT1 mRNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05)。结论:成功体外合成JSRV-env mRNA和FGF21 mRNA。JSRV-env mRNA能够表达产生针对JSRV-env的中和抗体。FGF21 mRNA可以改善胰岛素抵抗模型细胞对葡萄糖的摄取。