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目的:探讨原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞系Huh-7表达miR-122但HepG2细胞不表达miR-122的原因,并观察塞来昔布(celecoxib)对HCC细胞miR-122表达的影响。
方法:(1)提取Huh-7细胞及HepG2细胞基因组DNA,根据人类第18号染色体上miR-122编码序列和我们预测的两个miR-122编码序列的启动子序列设计引物,分别应用三对引物对两种细胞这三个区域进行扩增并测序。(2)通过real-time PCR方法检测经celecoxib处理的Huh-7、HepG2以及HL-7702细胞中miR-122表达量的变化情况。
结果:(1) Huh-7细胞miR-122编码序列及两个启动子序列均与GenBank中人类第18号染色体上的序列完全相符,HepG2细胞的两个启动子序列与GenBank中序列相吻合却检测不到miR-122的编码序列。(2)Celecoxib处理后24h Huh7细胞中miR-122表达量明显升高,而HepG2和HL-7702细胞中miR-122表达量没有明显的变化。
结论:(1)HepG2细胞距离miR-122编码序列最近的启动子和土拨鼠启动子都与GenBank中人类第18号染色体上的序列完全一致,这些都说明HepG2细胞不表达miR-122是因为miR-122编码序列的突变、缺失甚至是根本不存在miR-122编码序列所导致的而与miR-122的启动子序列无关。(2)Celecoxib能够促进Huh-7细胞中miR-122的表达,而对本身不表达miR-122的HepG2和HL-7702细胞miR-122的表达情况没有任何影响。