论文部分内容阅读
乙型肝炎是世界上主要的公共健康问题之一。我国约有1.3亿人为乙型肝炎病毒感染者。乙型肝炎病毒（HBV）感染机体后临床表型多样，轻者病毒自然清除、无症状携带，重者则可以持续感染导致肝硬化、肝功能衰竭甚至肝细胞癌。肝脏中，NK细胞占淋巴细胞总数的1/3，NK细胞在抗病毒感染中具有突出地位，病毒感染后，NK细胞较CTI更早发挥抗感染作用。
NK细胞的功能发挥依赖于NK细胞能够表达一系列活化性受体及抑制性受体。不同的KIR分子与HLAⅠ类分子结合，传导激活或抑制信号，两种信号之间的平衡决定NK细胞与靶细胞相互作用的结果，从而在肿瘤免疫、抗感染免疫，造血干细胞移植及清除老化异己细胞等方面发挥重要作用。
KIR及其配体的多态性对HBV遗传易感性和HBV感染后转归的影响还未明确。我们以肝癌高发启东地区乙肝感染人群为研究对象，该人群于1995年HBV流行病学调查时发现乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阳性，经过10年随访，2005年再次对该人群进行乙型肝炎两对半和肝脏功能检测，发现一部分HBsAg转阴，另一部分HBsAg仍然是阳性。本研究中将HBsAg和HBeAg均阴性且肝脏功能正常者，归为HBV清除组（n=161）；HBsAg阳性无论肝脏功能正常与否者，归为HBV持续感染组（n=493）。该人群来自于同一个地区，为一相对集中群体，有利于探讨HBV感染后的转归与KIR基因多态性、HLA等位基因多态性、KIR-HLA基因组合的关系。研究结果显示：
1.通过PCR-SSP方法分析了12种KIR基因在两组人群中的分布，发现KIR2DL5和KIR1D基因在两组人群中的分布有显著差异。KIR2DL5在持续感染组中的阳性率显著高于感染清除组（x2=4.095，p=0.044）；KIR1D在HBV感染清除组中的阳性率显著高于持续感染组（x2=6.072，p=0.014）；单倍型l在HBV感染清除组中的频率显著高于持续感染组（x2=4.78，p=0.029）；基因型AG在HBV感染清除组中的频率显著高于持续感染组（x2=3.899，p=0.048）；基因型从在HBV感染清除组中的频率显著高于持续感染组（x2=4.471，p=0.034）。
2.通过PCR-SBT方法分析经典HLAⅠ类等位基因在两组人群中的分布，发现等位基因HLA-B*130101、HLA-B*370101、HLA-B*520101/5207、HLA-Cw*030404在HBV感染清除组中的频率显著高于持续感染组，p值分别为0.000、0.023、0.045、0.06。HBV持续感染组中，等位基因HLA-A*33G1、HLA-Cw*04G1的频率高于感染清除组，p值分别为0.031和0.074。HBV感染清除组中，HLA-Bw4+纯合子的频率高于持续感染组，但未达到统计学意义。
3.HBV感染清除组中KIR2DS5+/2-4HLA-Bw4+、KIR3DL1+/2-4HLA-Bw4+、KIR3DL1+/HLA-Bw4+Bw4+、KIR1D+/HLA-Bw4+Bw4+、KIR1D+/HLA-C1+C1+的频率高于持续感染组，p值分别为0.065、0.09、0.145、0.049、0.011。KIR3DS1+/0-1HLA-Bw4+、KIR2DS5+/0-1HLA-Bw4+、KIR2DL5+/0-1HLA-Bw4+、KIR2DS1+/0-1HLA-Bw4+在HBV持续感染组中的频率显著高于感染清除组，p值分别为0.028、0.031、0.016、0.088。
4.两组人群中共发现了89种尚未在白人中检测到的KIR基因型（NEW），77种新基因型不能用已知的23种单倍型组合。12种新基因型可以用已知的单倍型组合，其中NEW1（2、6）、NEWO15（2、9）、NEWO11（5、6）、NEW002（5，19）、NEW5（5，18）、NEW101（5、14）、New029（5，5）、NEW040（2，11）、NEW043（2，18）、NEW075（1，18）分别在上海、浙江、云南、山东及南京地区已有报道。NEW067（1，13）和NEW026（5，13）未见报道，但在本研究小组其他地区人群中已有发现。在77种不能用已知单倍型组合的新基因型中，59种未见报道，但在本研究小组其他地区人群中已有发现。此外的18种新基因型为首次发现。
5.研究中发现两个新的HLA等位基因。基因序列分别被提交到EMBL核酸序列数据库和GeneBank核酸数据库，获取号码（accession number）分别为GQ365730和GQ365731。新基因已获得世界卫生组织命名法委员会（WHO Nomenclature Committee）的正式命名：HLA-B*40:127和HLA-C*01:34。
综上所述，启东地区KIR1D、单倍型1、基因型AG、基因型AA、HLA-B*130101等位基因、HLA-B*370101等位基因、HLA-B*520101/5207等位基因、HLA-Cw*030404等位基因、HLA-HLA-Bw4+Bw4+纯合子、KIR3DL1+/2-4HLA-Bw4+、KIR3DL1+/HLA-Bw4+Bw4+的存在可能有利于机体自身清除HBV病毒。KIR2DL5、HLA-A*33G1等位基因、HLA-Cw*04G1等位基因、KIR3DS1+/0-1HLA-Bw4+可能是HBV持续感染的易感因素。虽然本研究HBV持续感染组中KIR2DS5+/0-1HLA-Bw4+、KIR2DL5+/0-1HLA-Bw4+、KIR2DS1+/0-1HLA-Bw4+的频率高于感染清除组，KIR1D+/HLA-Bw4+Bw4+、KIR2DS5+/2-4HLA-Bw4+、KIR1D+/HLA-C1+C1+的频率低于感染清除组，但由于这些KIR分子的配体未知，因此这些基因组合的生物学意义还有待于进一步的研究。