【摘 要】
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酶的固定化方法很多,主要有吸附法、包埋法、共价键合法和交联法等;用于固定化酶的载体材料也很多,如凝胶、无机材料、有机聚合物以及生物材料等。本文初步探究了酶的固定化
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酶的固定化方法很多,主要有吸附法、包埋法、共价键合法和交联法等;用于固定化酶的载体材料也很多,如凝胶、无机材料、有机聚合物以及生物材料等。本文初步探究了酶的固定化载体材料的选择及酶的固定化方法,通过对一系列生物载体材料的比较,首次采用天然生物材料鱼鳔作为酶的固定化载体。鱼鳔的生物结构为葡萄糖氧化酶提供了很好的微生物环境,非常有利于酶的固定化。 以戊二醛为交联剂,采用共价交联的方法将葡萄糖氧化酶固定在鱼鳔膜上,然后将此酶膜附着在具有荧光猝灭效应的氧敏感光极膜上,置于自制的流通池内,制成检测葡萄糖的光学酶生物传感器。氧敏感膜是由被硅胶吸附的[Ru（dpp）3][（4-Clph）4B]2的凝胶颗粒组成,该聚合物在470nm激发波长下,可得到波长为605nm的发射峰,并且在与氧分子作用下,Ru（Ⅱ）的聚合物发生荧光猝灭效应。反应中,固定在鱼鳔膜上的葡萄糖氧化酶催化葡萄糖与氧分子作用,则在膜上产生消耗氧的动力学平衡,随着溶解氧的消耗,会产生荧光强度的增大,而荧光强度的改变是与葡萄糖浓度相关的,根据此原理可以对葡萄糖进行定量分析。 利用该传感器测定葡萄糖溶液,测得葡萄糖浓度线性范围,20℃时为0.100—0.800 mmol L-1;30℃时为0.010—0.400 mmol L-1。详细研究了pH值、缓冲液浓度、温度等因素对此传感器的影响,此外,测定了该传感器的重现性和选择性,重复实验的RSD值为2.1%,并且具有很高的选择性。在4℃下,此传感器的使用寿命为10个月,并成功地利用此传感器进行人体血糖、尿糖
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