环境温度变化及LPS、ConA共刺激大鼠致脾脏免疫功能变化的形态学研究

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目的:通过观察环境温度骤变及伴有LPS、ConA刺激时大鼠脾脏病理学变化和脾脏淋巴细胞亚群的数量变化,探讨不同环境温度下机体免疫功能变化的规律,为极端气候下疾病防治提供理论依据。方法:根据不同温度和是否LPS刺激和ConA刺激将144只9~15周龄雄性SD大鼠随机分为常温(20℃)对照组、常温LPS刺激组、常温ConA刺激组、4℃低温刺激组、4℃LPS刺激组、4℃ConA刺激组、-12℃低温刺激组、-12℃LPS刺激组、-12℃ConA刺激组、37℃高温刺激组、37℃LPS刺激组、37℃ConA刺激组共12组,每组12只大鼠。各组均观察1h、8h、24h和168h4个时间点,每时间点3只大鼠。动物在正常温度20℃下稳定饲养7天后,分别给予相应组环境温度变化和腹腔注射LPS(1mg/kg体重)、ConA(5mg/kg体重)。于各观察时间点处死动物,取脾脏组织以4%多聚甲醛液固定,石蜡包埋,常规HE染色和CD3~+T细胞、CD8~+T细胞和CD20~+B细胞免疫组织化学染色,用体视学方法测算各组大鼠脾组织中CD3~+T细胞、CD8~+T细胞和CD20~+B细胞的数密度。用统计软件SPSS17.0比较温度刺激组内各参数的差异和伴有LPS刺激或ConA刺激各组间参数的差异。结果:1.各单纯温度刺激组(4℃低温刺激组、-12℃低温刺激组、37℃高温刺激组)大鼠脾脏均出现不同程度的病理学改变,主要表现在脾脏白髓萎缩,淋巴小结减少,动脉周围淋巴鞘及淋巴小结内细胞数量及密度减少,分布稀疏,在-12℃低温刺激组表现最严重。单纯LPS刺激组和单纯ConA刺激组的组织学变化与正常对照组比较,动脉周围淋巴鞘变薄,单纯LPS刺激组出现淋巴小结增多,生发中心明显,细胞丰富;而单纯ConA刺激组则出现淋巴小结变少及其细胞数量减少等情况。当温度变化同时伴有LPS刺激时,生发中心多见,但较单纯温度刺激时略有减少,动脉周围淋巴鞘显著变薄,鞘内细胞密度稀疏。当温度变化同时伴有ConA刺激时,动脉周围淋巴鞘轻度变薄,淋巴小结内细胞密度稀疏。2.常温对照组大鼠脾脏动脉周围淋巴鞘部位以CD3~+、CD8~+T细胞为主,淋巴小结内以CD20~+B细胞为主。边缘区及红髓分别散在上述这些细胞。3.各单纯温度刺激组CD3~+、CD8~+T淋巴细胞的数密度均低于常温对照组,而CD20~+B细胞的数密度则高于常温对照组。4.单纯LPS刺激组与单纯ConA刺激组CD3~+、CD8~+T淋巴细胞的数密度均低于对照组,而CD20~+B细胞的数密度则高于对照组。5.温度变化~+LPS、ConA刺激时,各刺激组CD3~+、CD8~+T淋巴细胞的数密度均低于常温~+LPS、ConA刺激组,而CD20~+B细胞的数密度则高于常温~+LPS、ConA刺激组。6.各温度刺激对淋巴细胞影响程度不同。CD3~+T细胞和CD8~+T细胞可受高、低温影响而降低,以低温影响更明显,CD20~+B细胞可受高、低温影响而升高,则以4℃组最明显。结论:1.环境温度骤升或骤降都可引起脾脏病理学改变,出现动脉周围淋巴鞘变薄,生发中心变少及淋巴小结数量减少。2.环境温度骤升骤降都可引起脾脏淋巴细胞数量的变化,出现CD3~+T细胞、CD8~+T细胞减少等细胞免疫抑制现象及CD20~+B细胞升高等体液免疫增强现象。3.环境温度骤变与LPS或ConA共刺激时脾组织中CD3~+、CD8~+T淋巴细胞的数密度进一步降低而CD20~+B细胞的数密度进一步升高,也即细胞免疫进一步抑制和体液免疫进一步增强。ConA对机体的细胞免疫抑制作用更强,而LPS对机体体液免疫的促进作用更强。
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