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第一部分Sonic hedgehog改善1型糖尿病小鼠内皮祖细胞功能目的探讨Shh对1型糖尿病小鼠内皮祖细胞迁移和血管生成功能的影响。方法1.链脲佐菌素（STZ）诱导C57BL／6雄鼠1型糖尿病模型后饲养10周，取骨髓培养内皮祖细胞（EPCs），于第7天给予Shh信号通路激动剂（SAG）处理24h后用western blot法检测下游因子GLI-1表达情况，观察细胞给于SAG后Shh信号通路的变化，同时体外血管生成和细胞迁移实验，观察内皮祖细胞shh通路激活后小管形成和迁移能力的变化。2.链脲佐菌素（STZ）诱导C57BL／6雄鼠1型糖尿病模型后饲养10周，取骨髓培养内皮祖细胞，于第7天感染过表达Shh慢病毒24h后继续培48h,用western blot法检测下游因子GLI-1表达情况，观察细胞感染过表达Shh慢病毒后Shh信号通路的变化，同时，用荧光显微镜直接观察细胞转染情况。体外血管生成实验和细胞迁移检测，观察内皮祖细胞Shh通路激活后的小管形成和迁移能力的变化。结果1.给于Shh信号通路激动剂（SAG）处理的1型糖尿病内皮祖细胞westernblot法检测中下游因子GLI-1蛋白表达增高（P<0.05），细胞小管形成能力（P<0.05）和迁移功能（P<0.05）得到改善。2.过表达Shh慢病毒转染处理的1型糖尿病内皮祖细胞western blot法检测中下游因子GLI-1蛋白表达增加（P<0.05），细胞小管形成能力（P<0.05）和迁移功能（P<0.05）得到改善。小结1.1型糖尿病小鼠EPCs的Shh通路下调，给予激动剂SAG可增加下游因子GLI-1蛋白的表达。2．1型糖尿病小鼠EPCs功能下降，体外给予Shh受体激动剂SAG，细胞小管形成能力（P<0.05）和迁移功能（P<0.05）得到改善。3．糖尿病EPCs成功感染过表达Shh病毒，MOI值为10.4. Shh过表达糖尿病内皮祖细胞western blot法检测下游因子GLI-1蛋白表达增加（P<0.05）5．Shh过表达糖尿病内皮祖细胞，细胞小管形成能力（P<0.05）和迁移功能（P<0.05）得到改善。第二部分Sonic hedgehog过表达糖尿病内皮祖细胞功能促进1型糖尿病伤口愈合目的探讨Shh过表达糖尿病内皮祖细胞对1型糖尿病伤口愈合的影响。方法1.1型糖尿病模型10周后建立皮肤全层缺损模型，随机分为Control组，DM组，DM+EPCS组，在伤口周围分别多点注射生理盐水，内皮祖细胞（来源于GFP小鼠）。定期观察实验组和对照组伤口愈合情况，并于第18天取伤口周围直径1cm面积全层皮肤组织，冰冻切片后直接在荧光显微镜下观察内皮祖细胞参与伤口愈合的情况，用免疫组织化学法，HE染色法，观察皮肤组织血管新生及肉芽组织修复情况。2.1型糖尿病模型10周后建立皮肤全层缺损模型，随机分为CONTROL组，DM组，DM+EPCS组，DM+EPCS(SHH)组，在伤口周围分别多点注射生理盐水，内皮组细胞（来源于糖尿病小鼠），转染过表达Shh慢病毒内皮祖细胞。定期观察实验组和对照组伤口愈合情况，并于第18天取伤口周围直径1cm面积全层皮肤组织，冰冻切片后用免疫组织化学法，HE染色法，Mason染色法观察皮肤组织血管新生及胶原组织，肉芽组织修复情况。结果1.皮肤全层损伤模型（1）显示：与对照组相比，糖尿病伤口愈合缓慢（P<0.05）,内皮祖细胞促进糖尿病伤口愈合（P<0.05）。荧光显微镜下，内皮祖细胞实验组皮下组织可见位于散落点状荧光。免疫组化显示，内皮祖细胞实验组小血管数目多于糖尿病对照组。HE染色显示，实验组与正常皮肤结构形态相似，对照组可见上皮化，但上皮组织薄。2.皮肤全层损伤模型（2）显示：糖尿病伤口愈合缓慢（P<0.05）,转染过表达SHH慢病毒内皮祖细胞促进糖尿病伤口愈合（P<0.05）。免疫组化显示，实验组皮肤组织血管新生能力得到改善。HE染色和Mason染色显示，实验组与正常皮肤结构形态相似，对照组皮肤部分可见上皮化，但上皮细胞薄。小结1.正常内皮祖细胞治疗改善1型糖尿病伤口血管新生能力，促进糖尿病伤口愈合。2.与糖尿病内皮祖细胞相比，过表达Shh糖尿病内皮祖细胞能够改善糖尿病伤口血管新生能力，促进糖尿病伤口愈合。全文结论1.糖尿病小鼠的EPCs功能障碍，Shh信号通路下调，激活Shh通路可改善糖尿病EPCs的功能。2.过表达Shh基因的糖尿病治疗，可改善糖尿病伤口血管新生能力，促进糖尿病伤口愈合。