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目的:
探究小鼠脑部照射后肺部远期远位效应及分子机制。
方法:
1.C57bl/6和GFP-LC3小鼠脑部照射后，收集脑、肺、肝、肾、小肠、结肠等样本，HE染色，观察各组织的病理改变。Westernblot法检测脑和肺组织中LC3B、P62等相关蛋白的表达情况。
2.GFP-LC3小鼠脑部照射后，收集血清，蛋白质谱法筛选差异表达蛋白和分析信号通路，并用ELISA法验证小鼠血清中periostin的表达，westernblot验证脑中periostin、TGF-β1的表达。
3.人皮肤成纤维细胞WS1转染LC3后，Real-timePCR检测periostinmRNA的表达水平，及使用TGF-β通路抑制剂后细胞内periostinmRNA的表达水平。
4.C57bl/6和GFP-LC3小鼠脑部照射后，收集血液和肺组织样本，转录组芯片分别筛选血液中miRNA和肺组织中mRNA的差异表达，并用Real-timePCR验证miR-21a-5p的表达水平，westernblot验证肺组织中periostin、TGF-β1、fibronectin的表达。
结果:
1.C57bl/6和GFP-LC3小鼠脑部照射后，GFP-LC3小鼠的IR1组肺泡融合形成肺大泡、血管周围淋巴细胞浸润，IR3组肺泡上皮数量增多、肺间隔明显增厚、肺毛细血管充血，IR6组肺间隔增厚更加明显，而C57bl/6小鼠各组未见明显异常。对小鼠生存率统计结果显示，GFP-LC3小鼠IR6组生存时间明显缩短。
2.GFP-LC3小鼠血清蛋白质谱结果显示两组照射组periostin表达水平均升高。
3.GFP-LC3小鼠脑部受照射后10d，脑组织periostin和TGF-β1表达升高，照射后60d，肺组织LC3BⅡ／Ⅰ水平明显升高，且60d时血清periostin蛋白水平显著增高;C57bl/6小鼠脑部照射后60d，脑组织periostin和TGF-β1表达升高，自噬相关蛋白表达量无显著变化，血清periostin蛋白水平降低。
4.TGF-β通路抑制剂抑制转染LC3后WS1细胞内的periostinmRNA表达。
5.GFP-LC3小鼠脑部照射后60d，血清miR-21a-5p下调，肺组织TGF-β1、periostin、fibronectin蛋白水平升高。
结论:
1.GFP-LC3小鼠脑部照射后可引起肺纤维化的远位效应。
2.LC3参与小鼠脑部照射后肺远位效应的发生和调节，其机制为LC3通过调节TGF-β通路，增加periostin的表达，诱导肺纤维化的发生。
3.GFP-LC3小鼠脑部照射后，miR-21a-5p下调，经血液循环至肺部调节靶基因Tgfbi，引起肺部纤维化相关蛋白TGF-β1、periostin、fibronectin的表达增加，进而引起肺纤维化。
探究小鼠脑部照射后肺部远期远位效应及分子机制。
方法:
1.C57bl/6和GFP-LC3小鼠脑部照射后，收集脑、肺、肝、肾、小肠、结肠等样本，HE染色，观察各组织的病理改变。Westernblot法检测脑和肺组织中LC3B、P62等相关蛋白的表达情况。
2.GFP-LC3小鼠脑部照射后，收集血清，蛋白质谱法筛选差异表达蛋白和分析信号通路，并用ELISA法验证小鼠血清中periostin的表达，westernblot验证脑中periostin、TGF-β1的表达。
3.人皮肤成纤维细胞WS1转染LC3后，Real-timePCR检测periostinmRNA的表达水平，及使用TGF-β通路抑制剂后细胞内periostinmRNA的表达水平。
4.C57bl/6和GFP-LC3小鼠脑部照射后，收集血液和肺组织样本，转录组芯片分别筛选血液中miRNA和肺组织中mRNA的差异表达，并用Real-timePCR验证miR-21a-5p的表达水平，westernblot验证肺组织中periostin、TGF-β1、fibronectin的表达。
结果:
1.C57bl/6和GFP-LC3小鼠脑部照射后，GFP-LC3小鼠的IR1组肺泡融合形成肺大泡、血管周围淋巴细胞浸润，IR3组肺泡上皮数量增多、肺间隔明显增厚、肺毛细血管充血，IR6组肺间隔增厚更加明显，而C57bl/6小鼠各组未见明显异常。对小鼠生存率统计结果显示，GFP-LC3小鼠IR6组生存时间明显缩短。
2.GFP-LC3小鼠血清蛋白质谱结果显示两组照射组periostin表达水平均升高。
3.GFP-LC3小鼠脑部受照射后10d，脑组织periostin和TGF-β1表达升高，照射后60d，肺组织LC3BⅡ／Ⅰ水平明显升高，且60d时血清periostin蛋白水平显著增高;C57bl/6小鼠脑部照射后60d，脑组织periostin和TGF-β1表达升高，自噬相关蛋白表达量无显著变化，血清periostin蛋白水平降低。
4.TGF-β通路抑制剂抑制转染LC3后WS1细胞内的periostinmRNA表达。
5.GFP-LC3小鼠脑部照射后60d，血清miR-21a-5p下调，肺组织TGF-β1、periostin、fibronectin蛋白水平升高。
结论:
1.GFP-LC3小鼠脑部照射后可引起肺纤维化的远位效应。
2.LC3参与小鼠脑部照射后肺远位效应的发生和调节，其机制为LC3通过调节TGF-β通路，增加periostin的表达，诱导肺纤维化的发生。
3.GFP-LC3小鼠脑部照射后，miR-21a-5p下调，经血液循环至肺部调节靶基因Tgfbi，引起肺部纤维化相关蛋白TGF-β1、periostin、fibronectin的表达增加，进而引起肺纤维化。