bFGF促进HIE新生仔鼠内源性神经干细胞增殖和分化实验研究

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目的:探讨腹腔注射碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对缺氧缺血性脑病(HIE)模型新生仔鼠的影响。  方法:选孕20日SD大鼠13只随机分为实验组10只和对照组3只,实验组孕鼠打开腹腔结扎双侧子宫动脉15分钟,自然分娩,所分娩为宫内全脑缺氧缺血损伤模型组小鼠,对照组组同样打开腹腔但不结扎动脉,自然分娩;实验组仔鼠出生后3日随机分为碱性成纤维细胞生长因子组(bFGF组,n=22)、生理盐水组(NS组,n=20),对照组做为正常对照(n=15);bFGF组腹腔注射bFGF20ug/kg/d+BrdU50mg/kg/d连续7天,NS组和对照组注射等剂量的NS和BrdU同样7天,监测新生仔鼠D1-D10体重,死亡率,观察行为、形态变化;分别在仔鼠出生第一天和注射药物后一周灌注取脑,石蜡包埋切片,行HE染色观察神经元形态变化;在各组注射药物后第2周,行TUN E L法检测大脑皮层和海马区神经元的凋亡;分别在各组注射药物后第1、2、4周三个时间点行免疫组化法检测各组皮层区和海马齿状回巢蛋白(Nestin)、5-溴脱氧尿苷(BrdU)、胶质纤维酸性蛋白质(GFAP)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达;免疫荧光-激光共聚焦法观察BrdU/Nestin、BrdU/GFAP及BrdU/NSE的共定位表达。对照组与实验组做同期对照,统计学处理。  结果:实验组胎鼠总数76只,出生时活产鼠51只(胎死率32.9%),3日龄时,活鼠剩余42只,死亡率44.7%,对照组仔鼠无死亡。实验组新生仔鼠行动笨拙,喂养困难,鼠毛稀疏,四肢肌张力偏高。对照组体重增长快,NS组增长缓慢,bFGF组增长较快;免疫组化显示同周龄各组大鼠中对照组BrdU、Nestin、NSE、GFAP阳性细胞最少,bFGF组较NS组阳性细胞表达增加,组间两两比较具有统计学意义(P<0.05);共聚焦结果显示BrdU与Nestin、NSE、GFAP在大脑皮层与海马等部位有共定位表达,皆以bFGF组表达量最高,对照组最少;HE染色NS组细胞数减少、结构排列紊乱,胶质细胞增生,bFGF组细胞排列较整齐,数目较多;对照组细胞排列整齐,形态正常;TUN EL染色结果显示N S组凋亡神经元数目最多,bFGF组较少,对照组最少,组间两两比较有统计学意义(P<0.05)。  结论:产前结扎孕鼠双侧子宫动脉成功制备宫内缺氧缺血模型可以很好地模拟HIE,bFGF能促进HIE新生仔鼠内源性NSCs增殖,减轻神经功能损害。
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