人脂肪干细胞向神经球诱导分化的研究

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目的:神经退行性疾病的特点是大脑或脊髓内神经元和神经胶质细胞的丢失。将干细胞诱导分化为神经细胞,并进行移植,是治疗神经元丢失疾病的有希望的方法之一。目前,骨髓间充质干细胞、胚胎干细胞等已可诱导生成神经细胞。本研究拟观察人类脂肪干细胞向神经细胞的诱导分化。  方法:采用含20ng/ml EGF,20ng/ml FGF-2,2%B27的无血清培养基培养人脂肪干细胞,诱导人脂肪干细胞向神经球分化,进而向神经细胞分化。并采用免疫荧光染色、定量反转录酶-聚合酶链锁反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)技术对诱导前后的细胞进行相应鉴定。同时,采用免疫荧光标记、流式细胞术和CCK-8方法观察脂肪干细胞和诱导分化后细胞的增殖情况。  结果:人脂肪干细胞经诱导后,形成细胞球,该细胞球高表达巢蛋白(Nestin)(神经干细胞标记物),提示为神经球。免疫荧光染色、qRT-PCR及Western blotting分析均显示,该神经球在一定培养条件下,可分化成NeuN阳性(神经元标记物)的细胞和GFAP阳性(胶质细胞标记物)的细胞。此外,免疫荧光染色结果表明,人脂肪干细胞来源的神经球中部分细胞Ki67(细胞增殖标记物)阳性表达。但CCK-8检测细胞增殖表明,连续培养5d,人脂肪干细胞来源的神经球中活细胞数目未见明显变化。细胞周期分析显示,人脂肪干细胞来源的神经球中处于活跃增殖的阶段的细胞比例低于人脂肪干细胞。  结论:人脂肪干细胞经诱导后可分步分化成神经细胞。人脂肪干细胞可能是一个理想的替代治疗神经退行性疾病的细胞来源。
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