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小儿呼吸道感染、肠道感染是小儿感染性疾病中最为常见的两种疾病。这两类疾病中80%以上为病毒感染。在病毒感染性疾病中,呼吸道合胞病毒和C组腺病毒是婴幼儿时期呼吸道病毒感染最常见的病原体,可引起严重的毛细支气管炎和肺炎；而F组腺病毒和轮状病毒作为引起婴幼儿腹泻的最常见病原在世界各地均有散发和流行,因此对主要病原体进行监测和检测,在防控小儿传染病中具有重要的意义。自从1996年美国Applied Biosystems公司率先推出实时荧光定量PCR技术以来,该技术迅速被广泛应用于基础研究和病原体检测。实时荧光定量PCR技术可以对初始模板定量,具有特异性强、重复性好、灵敏度高、操作简便快捷、可实时监测等其他技术无法替代的优点已成为了核酸检测的重要工具：而复合探针技术是在荧光定量PCR基础上开发的新技术,除具备实时荧光定量PCR技术的全部优点外,还具有高效,快速,背景干扰小且成本低等优点,为病原微生物检测提供一种更为可靠有效的检测方法。本文以实时荧光定量PCR技术为基础,旨在对呼吸道合胞病毒、腺病毒及轮状病毒分别建立一种高效灵敏的实时荧光定量PCR检测方法,实现快速准确诊断,为进一步扩大小儿传染性疾病的监测和流行病学研究提供可靠有效的方法。依据TaqMan探针、复合探针实时荧光定量PCR引物探针设计原则,分别设计特异性的引物和探针,通过对比实验筛选出最佳引物探针组合：对PCR扩增体系中热启动Taq酶用量、逆转录酶用量、逆转录酶反应时间、PCR退火温度等反应体系和反应条件进行优化,建立最佳的实时荧光定量PCR检测方法；并对‘所建立的荧光定量PCR方法的灵敏性、特异性及精密性进行评价；同时将所建立的方法用于临床发热、肺炎和腹泻婴幼儿患者的痰液、粪便标本检测,对本方法的检测效果进行评估。经优化,确立了呼吸道合胞病毒、腺病毒、轮状病毒最佳反应体系和反应条件；呼吸道合胞病毒的检测灵敏度RSV A型最低可达2.0×102copies/mL、RSV B型最低可达5.0×102copies/mL;与非呼吸道合胞病毒等常见呼吸道病毒均无交义反应；批间批内变异系数均小于5%：对呼吸首合胞病毒感染患者咽拭子标本的检测结果表明：该方法与临床诊断结果的符合牢为99.23%。腺病毒的检测灵敏度ADV2型最低可达2.0×101PFU/ml、ADV40型最低可达5.0×101PFU/ml;与非腺病毒等常见呼吸道病毒、肠道炳毒均无交义反应；批间批内变异系数均小于5%；对腺病毒感染患者咽拭子、粪便标本的检测结果表明：该方法与临床诊断结果的符合率分别为99.14%、99.09%。轮状病毒的检测灵敏度RV SA-11标准株最低可达5.0×101PFU/ml;与非轮状病毒等常见肠道病毒均无交文反应：批间批内变异系数均小于5%；对来自王家医院轮状病毒感染患者粪便标本的检测结果表明：该方法与临床诊断结果的符合率分别为98.63%、99.17%和99.14%。本研究所建立的实时荧光定量PCR检测方法能够快速准确、特异、高灵敏度的对三种小儿常见病毒核酸进行定性检测,为临床提供新的更为可靠的检测方法。