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第一部分：芍药苷对6-OHDA诱导的大鼠黒质多巴胺能神经元损伤的保护作用 目的：建立6-OHDA诱导的PD大鼠模型，研究芍药苷（paeoniflorin，PF）和酸通道阻滞剂能否对黑质多巴胺神经元损伤起保护作用。 方法：选取雄性SD大鼠，立体定位仪下右侧纹状体予以注射10ug的6-OHDA（2ug/ul）制备PD模型。四周后观察阿朴吗啡（Apomorphine，APO）诱导的大鼠对侧旋转行为。模型成功的PD大鼠分6组，分别给予生理盐水、PF（15mg/kg）、PF（30mg/kg）、PF（60mg/kg）、阿米洛利（Amiloride，Ami，10mg/kg）和狼蛛毒素（psalmotoxin-1，PCTX1，0.7ug/kg）连续治疗21天，每周监测APO诱导的大鼠对侧旋转行为；给药结束后，处死动物，分离相应的脑组织，免疫组化法尼氏染色观察阳性神经元数，TH染色观察黑质多巴胺神经元数量；采用高效液相色谱法（HPLC）检测损毁侧大鼠纹状体DA及代谢产物DOPAC、HVA，5-HT及其代谢产物5-HIAA的含量；聚合酶链式反应法（PCR）检测损毁侧D1R、D2R以及DAT的受体mRNA的表达。 结果：(1)各浓度的PF、特异性酸通道抑制剂PcTx1、非特异性酸通道抑制剂Ami均能改善6-OHDA诱导的PD大鼠对侧旋转行为。(2)PD大鼠的未损毁侧黒质尼氏染色阳性神经元与假手术组无差异。生理盐水组损毁侧黒质尼氏染色阳性神经元与假手术组相比，下降42.9％（**p<0.01）。与生理盐水组比较，各实验药物治疗组损毁侧黒质尼氏染色阳性神经元有显著增多（＃＃P<0.01）。(3)PD大鼠的未损毁侧黒质TH阳性神经元与假手术组无差异。生理盐水组损毁侧黒质TH阳性神经元与假手术组相比，下降56.3%（**p<0.01）。与生理盐水组比较，各实验药物治疗组损毁侧黒质TH阳性神经元有显著增多（＃＃P<0.01）。(4)PD大鼠的未损毁侧纹状体DA及代谢产物DOPAC、HVA及DA代谢产物与DA之比与假手术组无差异。与假手术组相比，生理盐水组损毁侧纹状体DA下降72.1%，DOPAC下降50.3.%，HVA下降52.2%，DA代谢产物与DA之比上升46.8%（**p<0.01）。与生理盐水组比较，各实验药物治疗组损毁侧纹状体DA及代谢产物DOPAC、HVA含量显著升高，DA代谢产物与DA之比显著下降（＃＃p<0.01）。生理盐水组损毁侧纹状体5-HT及其代谢产物5-HIAA的含量与假手术组相比无明显差异，各实验药物治疗组与生理盐水组相比亦无明显差异。(5)PD大鼠的未损毁侧纹状体D1R、D2R以及DAT的受体mRNA的表达水平与假手术组无差异。生理盐水组损毁侧纹状体D1R、D2R以及DAT的受体mRNA的表达水平与假手术组相比下降明显（**p<0.01）。与生理盐水组比较，各实验药物治疗组损毁侧纹状体D1R、D2R以及DAT的受体mRNA的表达水平明显升高（＃p<0.05，＃＃p<0.01）。 结论：通过脑立体定位注射6-OHDA可成功建立PD模型，PF和酸通道阻滞剂对黑质多巴胺神经元损伤有明显保护作用，对纹状体多巴胺受体有一定调节作用。提示PF对黑质多巴胺神经元的保护与ASICs有关。 第二部分：芍药苷对6-OHDA诱导的PC12细胞和中脑原代神经细胞损伤的的保护作用 目的：建立6-OHDA诱导的的细胞损伤模型，研究芍药苷和酸通道阻滞剂能否改善6-OHDA对大鼠嗜铬细胞瘤（PC12）和原代培养的中脑神经细胞的损伤。 方法：体外培养PC12细胞和胎鼠的中脑神经细胞，预先加入无菌生理盐水、不同浓度PF（25，50，100uM）、PCTX1（2.5nM）和Ami（100uM）处理细胞1h，再加入6-OHDA（50uM）作用18h后，使用MTT法和LDH试剂盒测定各组细胞的存活率和损伤程度；免疫荧光技术观察中脑神经细胞内TH的表达，对DA能神经元纯度进行检测。 结果：(1)与control组比较，生理盐水组PC12细胞和中脑神经细胞其存活率均明显下降（**p<0.01），PC12细胞中下降约60%，中脑神经细胞中约50%，PF、PCTX1、Ami预处理组，存活率和生理盐水组比有显著上升（＃p<0.05，＃＃p<0.01）。(2)生理盐水组 PC12细胞和中脑神经细胞LDH值较对照组均明显上升（**p<0.01），PC12细胞中上升约69%，中脑神经细胞中约67%。与生理盐水组比，PF、AM、PCTX1预处理组，LDH值有显著下降（＃p<0.05，＃＃p<0.01）。(3)免疫荧光检测，原代培养的中脑神经细胞中DA能神经元纯度在7.56±1.23%。 结论：PF和酸通道阻滞剂对6-OHDA诱导损伤的的PC12细胞和原代培养的神经细胞有明显保护作用，提示PF对多巴胺能神经细胞的保护与ASICs有关。 第三部分：芍药苷对ASIC1a介导的α-syuclein自噬降解的调控作用 目的：研究PF和酸通道阻滞剂能否抑制敏感离子通道（Acid-sensing ion channels，ASICs），能否调控自噬并加速α-syuclein的降解。并探讨ASICs和自噬的关系，PF是否通过阻滞ASICs,尤其是ASIC1a来调控自噬发挥作用。 方法：以6-OHDA诱导的PD大鼠和PC12细胞为研究对象，通过免疫荧光和免疫印迹技术检测检测黑质和PC12细胞α-synuclein、自噬相关蛋白（LC3-Ⅱ、p62）以及ASIC1a的蛋白表达变化；通过膜片钳技术，检测PF是否能抑制酸处理后激发的电流。 结果：(1)在6-OHDA诱导的PD大鼠模型中，与假手术组比较，生理盐水组损毁侧黒质DA能神经元α-synuclein、LC－3 II、p62和ASIC1a蛋白水平显著增加（**p<0.01）。与生理盐水组比较，PF、PCTX1、Ami治疗组α-synuclein、LC－3 II、P62、ASIC1a的蛋白水平均有不同程度下降（＃＃p<0.01）。(2)在6-OHDA诱导损伤的PC12细胞中，与control组比较，生理盐水组α-synuclein、LC－3II、p62和ASIC1a蛋白水平显著增加（**p<0.01）， PF、PCTX1、Ami预处理后均能不同程度下调α-synuclein、LC－3II、P62、ASIC1a的蛋白水平（＃＃p<0.01）。(3)而且类似于PCTX1和Ami的作用，PF也对酸诱导的电流有一定抑制作用，且呈浓度依赖效应。(4)免疫荧光也显示了6-OHDA损毁侧黒质DA能神经元和6-OHDA诱导损伤的PC12细胞上和TH共表达的ASIC1a表达增加。 结论：6-OHDA作用后，出现ASICs激活，自噬活性过度上调，自噬功能障碍，细胞内α-syuclein聚集；PF和酸通道阻滞剂能够抑制酸诱导的电流,以及ASIC1a的表达；PF和酸通道阻滞剂均能改善自噬功能障碍，减缓自噬活性过度上调，促进α-syuclein的降解；抑制ASICs，尤其是ASIC1a，调节自噬可能是PF神经保护作用的机制。