论文部分内容阅读
在许多国家和地区，肺癌的发病率占恶性肿瘤的首位。绝大数肺癌起源于支气管粘膜上皮。目前肺癌治疗主要以外科切除为主化疗为辅，手术治疗仅适用于肺癌细胞未发生远处转移和淋巴转移时，而且成功率不高，化疗虽是治疗癌症的一种的常用方法，但是化疗药物的毒副作用及其耐药性，极大的限制了其在临床的的使用。中国传统中药因其具有多靶点、多效应的作用，及不良反应小、不易产生耐药性等优点，逐渐成为抗肿瘤研究中的新热点。同时，随着分子生物学得飞速发展，毒副作用较低的基因治疗越来越受到人们的关注。
表皮生长因子受体(EGFR)是原癌基因cerbB1的表达产物，是表皮生长因子受体(HER)家族成员之一。HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。EGFR表达于正常上皮细胞表面，但在一些肿瘤细胞中过度表达，特异性抑制EGFR表达可以降低表皮生长因子活性，从而抑制癌细胞生长直至癌细胞死亡，所以EGFR可以作为基因治疗的理想靶点。
在以EGFR为靶点的肿瘤基因治疗中，一般采用siRNA干扰技术来沉默靶向基因，本实验根据RNA干扰的设计原则，以EGFR为靶点、设计靶向EGFR基因的小干扰RNA，以EGFR高表达的肺癌细胞A549研究对象，采用SRB和RT-PCR的方法，从3条siRNA序列中筛选出沉默率较高的siRNA序列。
碳纳米管特殊的光学性质、大的比表面积、高的热稳定性、化学惰性、中空结构、独特的跨膜能力均使碳纳米管成为理想的药物载体，尤其是碳纳米管大的比表面积更是为药物提供了更大的空间，同时碳纳米管的稳定性和灵活性可以提高药物的生物利用度。因此碳纳米管在肿瘤的靶向治疗中具有很大的潜力。
姜黄素(curcumin)是一种来源于姜黄的天然黄色多元酚类化合物，姜黄素在体内和体外可通过多种机制产生抗癌活性，抑制肿瘤的细胞增殖，诱导多种肿瘤细胞的体外凋亡，姜黄素现在已经应用于体内多种癌症的治疗和预防，并已进入二期临床试验阶段。但是姜黄素较低的水溶性和生物利用度限制了姜黄素在抗癌治疗中的使用。本实验以修饰的碳纳米管为载体，有效的增加姜黄素的水溶性，使其浓度提高至1.8mg/ml。O-SWNTs-Cur-DOTAP载药体系的粒径稳定在254±2.34nm，电位在15±1.11mv。红外和差示热分析结果说明载药体系中姜黄素不是以结晶状态存在。体外释放中载药体系显示了速释和缓释结合的特点，姜黄素的载药体系在温度加速实验和光照加速实验中显示出了一定的稳定性。体内药动实验说明姜黄素的载药体系与姜黄素相比具有一定的优势。
化学治疗和放射治疗的治疗原理不同，基因治疗与传统的化疗、放疗联合是肿瘤治疗上的新策略。实验中制备O-SWNTs-Cur-DOTAP/siRNA，表征其制剂的特性，通过SRB测定肿瘤细胞增殖、转染率的检测、细胞的凋亡、细胞的周期等检测，结果显示姜黄素化疗与靶向EGFR基因治疗结合可显著提高细胞抑制率、增加siRNA的转染效率、诱导癌细胞的凋亡，遏制癌细胞的周期。药物体内实验证明其具有明显的抑制效果。