抑制PI3K/Akt通路提高K562细胞对柔红霉素的化疗敏感性的研究

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目的检测PI3K/Akt抑制剂LY294002及蒽环类化疗药物柔红霉素(DNR)对慢性髓系白血病细胞株K562的增殖抑制作用及促凋亡作用,并探讨其作用机制。方法(1)体外培养K562细胞,MTT比色法检测LY294002和DNR在不用浓度、不同作用时间点对K562细胞增殖的影响,流式细胞仪检测LY294002作用前后细胞周期变化。(2)选取LY294002及DNR的浓度分别为10μmol/L及0.5μg/mL做进一步研究,实验分4组:对照组(Control)、LY294002组、DNR组、联合用药组(L+D),观察各实验组作用不同时间后K562细胞形态变化,AO/EB双荧光法观察细胞凋亡情况,流式细胞术检测各组细胞周期变化。(3)RT-PCR方法检测各实验组作用36h后K562细胞Skp2、P27、Bcl-2和BaxmRNA的表达。(4)Western blot方法检测各实验组作用36h后K562细胞Skp2、P27、Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果(1)LY294002和DNR均能够抑制K562细胞的生长并促进细胞凋亡,该抑制作用具有浓度及时间依赖性(P<0.05),联合用药组细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均高于DNR单药组(P<0.05)。(2)LY294002作用K562细胞36h,随着浓度的增加G0/G1期阻滞增强,S期细胞减少(P<0.05),DNR组与对照组相比G0/G1期细胞明显减少,S期细胞增加(P<0.05);联合用药组G2/M期细胞显著减少,较对照组及DNR单药组相比差异均有统计学意义(P<0.05),与DNR单药组比较G0/G1期细胞增加(P<0.05),S期细胞减少但差异无统计学意义。(3)各药物处理组与对照组相比以及联合用药组与DNR单药组相比,Skp2及Bcl-2的mRNA表达量减少,P27mRNA表达增高,差异具有统计学意义,Bax的表达在各实验组中的差异无统计学意义,但计算Bcl-2/Bax比值,各药物处理组与对照组比较以及联合用药组与DNR单药组比较,数值均明显降低(P<0.05)。(4)Western blot结果显示,各药物处理组与对照组比较以及联合用药组和DNR单药组比较,Skp2的蛋白表达量显著降低,P27的蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量明显降低,差异均有统计学意义,Bax的蛋白表达量各组之间差异无明显统计学意义,Bcl-2/Bax比值各药物处理组与对照组比较以及联合用药组与DNR单药组比较,数值均明显降低(P<0.05)。结论PI3K/Akt抑制剂LY294002可以抑制K562细胞的增殖并促进其凋亡,对DNR有化疗增敏作用,其作用可能通过阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡来实现。
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