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紫茎泽兰(Eupatorium adenopkorum Spreng)是菊科(Compositae)泽兰属多年生草本植物,以种子繁殖为主,同时兼具极强的无性繁殖能力。该植物原产于南美洲,自上世纪40-50年代由东南亚传入我国云南南部后,现已成为危害最为严重的入侵植物之一。紫茎泽兰叶中富含绿原酸等酚类化合物,对其加以资源化利用是防控该植物进一步扩散的一项有效措施。因此,本研究对紫茎泽兰不同发育程度叶片中酚类成分的分布和积累动态规律进行了探索,目的是为确定植物原料的合理采收期提供理论依据。本文的主要研究结果如下:
采用Folin-Ciocalteu法测定叶器官中总酚含量的结果显示,在叶片从幼嫩到成熟的过程中,总酚含量呈急剧下降的趋势,其变化范围在57.36-15.43 mg/g之间;且以顶叶(最幼嫩)中的总酚含量为最高(57.36 mg/g),其与成熟叶和衰老叶相比均存在显著差异(P<0.05)。
采用紫外分光光度计法测定酚类代谢关键酶PAL和C4H活性的结果显示,在叶片从幼嫩到衰老的过程中,这两种酶的活性总体上均呈下降趋势;其活性变化范围分别在6166.67-41.67 U/g鲜重之间和5322.00-1073.33 U/g鲜重之间;均以顶叶中的酶活性为最高,其与成熟叶和衰老叶相比均存在显著差异(P<0.05)。
应用Neus-荧光显微镜法对紫茎泽兰叶片酚类物质进行组织化学的结果显示,在紫外光激发下,不同发育程度叶片的叶肉细胞内均发出绿色荧光,绿色荧光的产生部位主要为叶绿体和液泡;绿原酸标准品在紫外激发下亦发出相似的绿色荧光模式,初步推测叶肉细胞中绿色荧光发生的部位很可能就是绿原酸分布的场所。
利用漆酶-胶体金法对紫茎泽兰叶肉细胞酚类物质进行细胞化学定位的结果显示,酚类成分主要分布于叶绿体上的造粉体、细胞壁及液泡中,同时细胞质中也有少量金颗粒存在。
综上所述,本文得出以下结论:
(1)总酚含量、PAL和C4H酶活性在紫茎泽兰不同发育程度叶中均存在显著差异,且随着叶片由幼嫩至成熟而呈现急剧下降的趋势。
(2)在紫茎泽兰植株上叶片普遍未成熟时进行采收最为适宜。
(3)紫茎泽兰酚类物质在叶中主要分布于叶肉组织,且叶绿体和液泡是其主要的积累场所。
(4)在叶肉细胞中造粉体可能是酚类成分的主要合成场所,并由此处将富集的酚类物质转移到细胞的其他部位;同时,叶绿体与酚类物质间的密切联系暗示了酚类成分的光保护功能,这可能是紫茎泽兰适应高海拔生境的一种重要生理机制。