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研究目的:
通过细胞膜微粒和血管内皮细胞共同培养的方法,进一步研究细胞膜微粒对血管内皮细胞功能,特别是细胞活性和凋亡的影响,探讨细胞膜微粒在激素相关性股骨头缺血坏死(avascular necrosis of femoral head,ANFH)的发生机制中所起的作用。
研究方法:
实验对象:实验中选择体外培养的第三代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为研究对象。实验刺激物:在细胞培养基中分别加入健康人、激素诱导股骨头坏死患者、酒精诱导股骨头坏死患者和和使用大剂量激素治疗患者血液中分离出的富含细胞膜微粒的血浆。
检测方法:细胞膜微粒和内皮细胞共同培养一段时间后倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,并用流式细胞仪检测细胞培养基中膜微粒种类和数量的改变,用CD62E+/CD31+表示内皮细胞活性。RT-PCR检测内皮细胞凋亡基因的表达,用fas/beta-actin表示细胞凋亡基因的程度。
结果:
1.倒置相差显微镜观察细胞:发现各组内皮细胞的形状、密度、生长速度和细胞核的形态没有明显差异。
2.流式细胞仪分析:共培养48小时后,培养基中细胞膜微粒数量和种类变化:使用激素的实验组CD62E+/CD31+明显低于对照组(P=0.035),其他各实验组和对照组无明显差异(P>0.05)。
3.RT-PCR分析凋亡基因:激素性ANFH的实验组fas/beta-actin明显高于对照组(P=0.006)。使用激素的实验组高于对照组(P=0.005)。其余各实验组和对照组之间无明显差异(P>0.05)。
结论:
1.使用激素患者的细胞膜微粒在体外有促进血管内皮细胞凋亡的作用,因而可能在体内加重微循环障碍。
2.激素性股骨头坏死患者的细胞膜微粒在体外能够增加血管内皮细胞凋亡基因的表达,但是对内皮细胞释放膜微粒无明显影响。
3.健康人和酒精性股骨头坏死患者的细胞膜微粒在体外对血管内皮细胞的凋亡无明显影响。