三氧化二砷对CIA模型大鼠NF-κB信号的调控作用及NF-κB信号与老年类风湿关节炎患者中医证型的相关性

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第一部分三氧化二砷对CIA模型大鼠NF-κB信号的调控作用  目的:通过建立胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠,探讨三氧化二砷(AS2O3)抗炎作用及对NF-κB信号的调控机制。  方法:将60只健康清洁级Wistar大鼠随机分为6组,每组10只,分别为空白对照组、模型对照组、雷公藤对照组及AS2O3低、中、高剂量治疗组,除空白对照组外,其余各组建立CIA模型,于造模第1天开始给药,连续用药4周后用3%乌拉坦腹腔注射麻醉后,股动脉取血并分离血清,处死大鼠,剥除后肢膝关节皮肤,分离滑膜及关节软骨,苏木精-伊红染色法光镜下观察关节及滑膜的病理改变,酶联免疫吸附测定法(Elisa)检测细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,免疫印迹杂交法(Western-Blot)检测NF-κB信号蛋白的表达。  结果:  1.成功构建了CIA大鼠模型。与空白对照组比较,模型组关节肿胀率明显升高;各治疗组与模型对照组同一时间点相比,关节肿胀率明显减轻; AS2O3低、中剂量治疗组与雷公藤对照组相比无统计学差异; AS2O3高剂量治疗组关节肿胀率低于与雷公藤对照组,具有统计学差异。  2与空白对照组相比,模型对照组IL-1β、TNF-α表达升高;与模型对照组相比,各治疗组IL-1β、TNF-α表达均有表达有不同程度下降,AS2O3高剂量治疗组降低最明显,与雷公藤对照组相比具有统计差异。  3.与空白对照组相比,模型对照组NF-κB/P65、NF-κB/P50的蛋白活性升高;各治疗组与模型对照组相比,NF-κB/P65、NF-κB/P50的蛋白活性降低;AS2O3高剂量治疗组降低更明显,与雷公藤对照组相比具有统计学差异。  结论:AS2O3能减轻CIA大鼠关节肿胀,降低滑膜淋巴细胞浸润,下调血清致炎因子IL-1β、TNF-α的表达和NF-κB/P65、NF-κB/P50蛋白活性。  第二部分 NF-κB信号与老年RA患者中医证型的相关性  目的:探讨老年类风湿关节炎(RA)患者炎性活动指标及核因子kappaB(NF-κB)信号与中医证候分型的相关性。  方法:收集2014年1月到2014年12月贵阳中医学院第二附属医院风湿免疫科住院或门诊的60例老年RA患者,根据中医辨证分型标准进行辨证分型,并检测患者的炎性指标C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、类风湿因子(RF)及NF-κB/P65、NF-κB/P50信号蛋白的表达情况,评价其与中医证型的相关性。  结果:  1.NF-κB/P65、NF-κB/P65检测结果显示湿热痹阻证表达水平最高,与寒湿痹阻证、肾气虚寒证、肝肾阴虚证和瘀血痹阻证比较有统计学差异。  2.CRP和ESR检测结果以湿热痹阻型升高最为明显,与瘀血痹阻证和肾气虚寒证比较具有统计学差异(P<0.01); CRP检测结果由高到低的顺序为湿热痹阻证>寒湿痹阻证>肝肾阴虚证>肾气虚寒证>瘀血痹阻证。ESR检测结果由高到低的顺序为湿热痹阻证>寒湿痹阻证>肝肾阴虚证>瘀血痹阻证>肾气虚寒证。  3.抗CCP抗体检测结果以湿热痹阻证为最高,与寒湿痹阻证、肾气虚寒证、肝肾阴虚证、瘀血痹阻证比较具有统计学差异;抗CCP检测结果由高到低排列为湿热痹阻证>瘀血痹阻证>肝肾阴虚证>寒湿痹阻证>肾气虚寒证。  4.RFIgM、RFIgG检测结果以湿热痹阻证升高最为明显,与寒湿痹阻证、瘀血痹阻证比较具有统计学差异;RFIgA检测结果在各证型间两两比较无统计学意义。  结论:  1.老年RA患者NF-κB信号蛋白的表达在中医湿热痹阻证中升高最明显,在肾气虚寒证中最低。  2.老年RA患者CRP、ESR等炎性指标及抗CCP抗体、RF在湿热痹阻证中升高最明显,可能与急性活动期湿热痹阻证发病较高有关。
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