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1目的本课题以中医学“肾精-脑髓”和“气血-血瘀”相关理论为依据,将Wnt/-catenin信号调控做为研究切入点,采用MCAO/R动物模型,主要通过益气活血法代表方脑络欣通方和补肾生髓法代表方补肾生髓方,对脑缺血再灌注大鼠进行干预,观察模型大鼠缺血侧海马及额顶叶皮质区GSK3α、Sfrp1和Wnt9a蛋白表达的影响,最后通过实验结果和相关实验数据,从分子生物学角度对益气活血法和补肾生髓法治疗缺血性中风的机制和原理进行阐述和分析。2方法首先选择健康Sprague-Dawley(SD)的雄性大鼠,总共56只,月龄4个月左右,体重在280-320g之间。随机将此56只实验大鼠分为4组,分别记为假手术组、模型组、益气活血法组和补肾生髓法组,每组14只,并为每组大鼠进行标记,将每组标记的大鼠再随机分为2组,记为3d、7d组,每组7只。采用改良线栓法建立局灶性右侧脑缺血大鼠模型,同时将益气活血法代表方脑络欣通方以及补肾生髓法代表方补肾生髓方,取中等剂量:8.54g/kg、12.87g/kg,对大鼠进行灌胃给药。益气活血法组和补肾生髓法组在复制MCAO/R模型前0.5h灌胃给药1次,以后于每天上午9:00和下午4:00分别灌胃一次,持续给药3d、7d,假手术组和模型组给予同等剂量的生理盐水灌胃。选取大鼠新鲜缺血侧海马及额顶叶皮质,应用Western-Blot技术检测GSK3α、Sfrp1和Wnt9a蛋白表达并加以分析,扫描显色后的底片,运用专业软件Image J对图像进行灰度分析,SPSS20.0处理所得数据,所得结果采用VISIO 2007软件进行图表绘制。3结果Western Blot结果显示:GSK3α条带位于46/51kda处,Sfrp1条带位于33kda处,Wnt9a条带位于37kda处,Actin条带位于42/44kda处。益气活血法3d组和补肾生髓法3d组对脑缺血再灌注大鼠缺血侧海马区GSK3α、Sfrp1和Wnt9a蛋白表达的影响:与假手术组比较,模型组三种蛋白的相对表达量均明显升高(P<0.01);与模型组比较,益气活血法组和补肾生髓法组三种蛋白表达均明显降低(P<0.01);与补肾生髓法组比较,益气活血法组三种蛋白表达均明显降低(P<0.01)。额顶叶皮质区与海马区结果一致。益气活血法7d组和补肾生髓法7d组对脑缺血再灌注大鼠缺血侧海马区GSK3α、Sfrp1和Wnt9a蛋白表达的影响:与假手术组比较,模型组三种蛋白表达均明显升高(P<0.01);与模型组比较,益气活血法组和补肾生髓法组三种蛋白表达均明显降低(P<0.01);两种复方无显著差异(P>0.05)。额顶叶皮质区与海马区结果一致。4结论两种中药复方能通过抑制缺血侧海马及皮质GSK3α、Sfrp1和Wnt9a蛋白表达,调节Wnt/-catenin信号通路,促进局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织修复。