论文部分内容阅读
冷适应物种崇安髭蟾（Leptobrachiumliui）隶属两栖纲Amphibia无尾目Anura角蟾科Megophryidae拟髭蟾属Leptobrachium，为我国特有的两栖动物。依据中高纬度冷适应物种在冰期扩张和在间冰期收缩的假说，我们假设“中低纬度山地高海拔冷适应物种的分布在冰期向低海拔扩张而在间冰期向高海拔收缩”。为了验证这一假说，选取崇安髭蟾为材料，拟基于微卫星分子标记进行分析。对于没有报道过的物种，微卫星分子标记大多需要重头筛选，是当前涉微卫星分子标记运用的重要环节。本论文侧重于该物种微卫星标记的筛选及相关检测，以期为下一步运用微卫星数据对假说进行验证打下基础。主要研究内容及结论如下:
(1)崇安髭蟾多态性微卫星分子标记的开发。利用磁珠富集法从崇安髭蟾中成功筛选出12个高度多态性微卫星位点。这些微卫星位点的等位基因从3到17不等，观测杂合度和期望杂合度分别从0.512到0.884和从0.580到0.898，哈温平衡检测发现仅有一个位点不符合哈温平衡，但经过连续Bonferroni校正过后所有的位点都符合哈温平衡。这些高度多态性位点可有效的用于下一步的微卫星频率数据分析。
(2)崇安髭蟾武夷山和猫儿山两个种群遗传多样性现状。利用筛选到的12个多态性位点初步分析评价了崇安髭蟾武夷山种群和猫儿山种群两个种群共88个个体的遗传多样性。分析结果显示，在所有12个位点共得到187个等位基因，平均每个位点为15.6个等位基因。瓶颈效应分析表明崇安髭蟾两个种群存在遗传瓶颈的可能性不大。
(3)崇安髭蟾微卫星引物的跨种检测。利用筛选的12个多态性位点对近缘种峨眉髭蟾（L.boringii）、雷山髭蟾（L.leishanense）和哀牢髭蟾（L.ailaonicum）进行通用性检测，发现仅2个位点是崇安髭蟾特有的位点，其余10个位点在这三个物种中至少部分个体能扩增出目的条带，说明这10个位点在峨眉髭蟾、哀牢髭蟾和雷山髭蟾中具有一定的保守性，初步试验证明我们从崇安髭蟾中开发的这10个微卫星位点有可能可以作为分子标记在近缘类群拟髭蟾属部分物种中应用。