【摘 要】
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本研究以不同密度的蔗糖溶液为介质，按比例配制两种密度的分离液，对采自广东省的奶牛粪便进行分离纯化，得到了较纯净的牛源环孢子虫卵囊；并采用改良抗酸染色法对纯化后的卵囊进行
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本研究以不同密度的蔗糖溶液为介质，按比例配制两种密度的分离液，对采自广东省的奶牛粪便进行分离纯化，得到了较纯净的牛源环孢子虫卵囊；并采用改良抗酸染色法对纯化后的卵囊进行染色和形态学观察。试验依次采用了饱和蔗糖漂浮、乙酸乙酯纯化和密度梯度离心等步骤，对环孢子虫卵囊进行分离和纯化。其中乙酸乙酯纯化法获得良好的分离效果，为密度梯度离心法进一步纯化卵囊奠定了基础。经过密度梯度离心的结果判定，牛源环孢子虫卵囊绝大多数介于密度为1.053g/ml和1.094g/ml蔗糖溶液的中间层，该层卵囊回收率达到90％以上。通过对不同染色时间和染色效果的比较发现，改良抗酸染色的最佳时间程序为10min-5min-1min，为了节省检测时间，提高检测效率，也可选择2min-1.5min-1min的时间程序。
本研究进行了牛源环孢子虫的动物感染试验，初步建立了牛源环孢子虫的小鼠模型。本试验利用注射地塞米松的三周龄的SPF昆明小鼠为免疫抑制动物模型，通过食道灌胃感染牛源环孢子虫。通过观察临床症状，定期跟踪收集粪便并采用抗酸染色法检查，来判断小鼠是否被感染。结果显示试验组小鼠自感染后第3天开始排出卵囊，此后，卵囊数逐渐增多，并在第9天时达到高峰，试验组小鼠表现出明显的临床症状。结果表明，利用地塞米松抑制昆明小白鼠的免疫功能后，灌胃感染牛源环孢子虫，小鼠模型初步获得成功。
另外，还运用巢式PCR方法扩增了牛源环孢子虫卵囊18SrDNA基因的部分序列，并对该序列进行了克隆和测序，比较了该虫株与其他已报道虫株的亲缘关系，为进一步研究环孢子虫的分子遗传特征奠定基础。试验以纯化的牛源环孢子虫卵囊为材料，利用DavidA.Relman等(1996)报道的两对巢式PCR引物对一株牛源环孢子虫样品进行基因组DNA的扩增，成功扩增了18SrDNA部分序列，片段大小为296bp。所扩增的片段纯化后成功地克隆于pMEG-Teasy载体。经过序列分析，该序列与肖淑敏等报道的广州牛源环孢子虫虫株完全一致，与其他艾美尔球虫的亲缘关系较近。由此说明，在广东首次发现的牛源环孢子虫属于艾美尔科环孢子虫属的一种新的寄生虫。
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