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肺癌是临床中最常见的恶性肿瘤,其发病率和死亡率居于所有恶性肿瘤的首位。目前,手术切除仍是根除肺癌最有效的途径,但是大部分患者发现时肿瘤已经处在转移阶段,失去了手术机会。免疫疗法作为肿瘤治疗的一部分被广泛关注,树突状细胞(DCs)因具有肿瘤抗原提呈功能在肿瘤免疫中的治疗中受到广泛研究。脂质代谢异常可导致肿瘤免疫抑制,内质网应激通路IER1α-XBP1通路诱导的脂质堆积造成了肿瘤相关树突状细胞(TDCs)抗原呈递功能降低,进而促进了免疫抑制微环境的形成。肺瘤平膏是由中国中医科学院广安门医院朴炳奎教授研制的临床治疗肺癌具有确切疗效的中药复方,既往大量临床试验发现,肺瘤平膏能延长瘤体的稳定时间,改善患者生活质量,降低化疗、放疗所引起的毒副反应,尤其是改善气阴两虚型肺癌患者的症状。大量的基础实验也表明,中药复方肺瘤平膏能够明显高树突状细胞功能,提高NK细胞杀伤活性;可通过调节树突状细胞的抗原递呈功能发挥抗肿瘤效应,其作用机制与抑制血管生成,上调DCs相关膜分子表达,诱导成熟、增加免疫突触形成,促进迁移、提高T细胞杀伤活性等有关,并且肺瘤平膏在调控PI3K-AKT信号通路方面具有一定优势,基于课题组前期研究的基础,我们进行了以下实验:目的:1)研究XBP1过表达对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织中TDCs功能和脂质的影响及产生的效应机制;2)研究肺瘤平膏对XBP1过表达Lewis肺癌肿瘤组织中TDCs的功能和脂质影响及产生了效应机制;3)揭示肺瘤平膏通过XBP1介导的脂质堆积分子机制。方法:1)通过克隆载体技术制备XBP1过表达慢病毒,并通过细胞转染技术制备XBP1过表达Lewis细胞稳转株;建立XBP1过表达Lewis肺癌小鼠荷瘤模型,分四组:XBP1过表达组(G组)、XBP1过表达加载肺瘤平膏组(GF组)、正常Lewis肺癌组(N组)、正常Lewis肺癌加载肺瘤平膏组(NF组),2)在14天、21天观察XBP1过表达对Lewis肺癌荷瘤小鼠TDCs功能、T细胞亚型、Treg、炎性细胞因子、TDCs中脂质含量、移植瘤的影响;3)在14天、21天观察肺瘤平膏对XBP1过表达Lewis肺癌荷瘤小鼠TDCs功能、T细胞亚型、Treg、炎性细胞因子、TDCs中脂质含量、移植瘤的影响;4)采用qPCR方法观察肺瘤平膏对XBP1过表达Lewis肺癌/正常Lewis肺癌荷瘤小鼠IDO1、Arg1、IRE1α-XBP1通路及PI3K-AKT-MTOR通路的mRNA含量的影响;采用Western blot的方法观察肺瘤平膏对XBP1过表达Lewis肺癌荷瘤小鼠IRE1α-XBP1通路及PI3K-AKT-MTOR通路蛋白表达的影响。结果:1)通过GV358质粒为载体,采用慢病毒转染技术,成功的制备了XBP1过表达慢病毒载体;通过细胞转染技术,成功将XBP1过表达慢病毒载体导入的Lewis肺癌细胞;并建立了小鼠移植瘤模型;2)与N组相比,XBP1过表达能抑制TDCs的功能,其中以CD80的抑制最明显(14day,P<0.01;21day,P<0.01);21天时明显降低CD3+CD8+的表达(P<0.05);上调Treg表达(14day,P<0.01;21day,P<0.05);21天时促进TGF-β1的分泌(P<0.01),降低TNF-α的浓度(P<0.01);增加TDCs中的脂质含量(21day,P<0.01),促进小鼠移植瘤的生长。3)与G组相比,GF组能明显提高TDCs表面标志的水平,其中以MHC-Ⅱ、CD40、CD80较为显著(P<0.05),增加抗原呈递功能;上调T细胞亚型CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+的表达(P<0.05),降低Treg细胞的表达水平(14day,P<0.01;21day,P<0.05);降低血清中TGF-β1的浓度(14day,P<0.05;21day,P<0.05),升高TNF-α的浓度(21day,P<0.05);降低TDCs中的脂质堆积(21day,P<0.05),抑制肿瘤的生长。4)qPCRIDO1结果显示:G组IDO1mRNA的表达大于N组,其中以14天有统计学意义;G组的IDO1的mRNA表达高于GF组,且差异有统计学意义(14day,P<0.01;21day,P<0.05);NF组IDO1的mRNA表达量低于N组,其中以14天差异最显著(P<0.01)。5)qPCR Arg1结果显示:G组Arg1 mRNA的表达大于N组,且差异有明显的统计学意义(14day,P<0.05;21day,P<0.01);G组Arg1 mRNA表达高于GF组,且差异有统计学意义(P<0.05);NF组Arg1的mRNA表达量低于N组,其中以21天差异最显著(P<0.05)。)表明肺瘤平膏能降低小鼠肿瘤组织IDO1、Ar1 mRNA含量。6)qPCR IRE1α-XBP1通路结果显示:14天时,G组各mRNA含量均大于N组,且差异有统计学意义(P<0.05);G组的各mRNA表达高于GF组,其中以Bip(P<0.01)、IRE1α(P<0.05)差异最明显。与N组相比,NF组中Bip mRNA含量降低,且差异有统计学意义(P<0.01)。21天时,G组各mRNA含量均大于N组,其中以Bip(P<0.01)、XBP1(P<0.05)差异显著;GF组的各mRNA表达低于G组,且差异有明显的统计学意义(P<0.05);NF组各mRNA表达低于N组,但差异无明显统计学意义(P>0.05)。7)qPCR PI3K-AKT-mTOR通路结果显示:14天时,G组各mRNA含量均大于N组,其中以PI3K(P<0.05)差异显著;GF组的各mRNA表达低于G组,其中以mTOR(P<0.05);NF组各mRNA表达低于N组,但差异无明显统计学意义(P>0.05)。21天时,G组各mRNA含量均大于N组,其中以AKT(P<0.05)差异显著;G组各mRNA含量均大于N组,且差异有明显的统计学意义(P<0.05);NF组各mRNA表达低于N组,其中以AKT、mTOR差异最显著(P<0.05)。表明肺瘤平膏能降低IRE1α-XBP1及PI3K-AKT-mTOR通路mRNA含量。8)Western Blot IRE1α-XBP1通路结果显示:14天时,G组各组蛋白均大于N组,但差异无统计学意义;肺瘤平膏加载组Bip、IRE1α的蛋白表达均小于未加载肺瘤平膏组,其中GF组的Bip蛋白表达小于G组最显著(P<0.01)。在21天时,G组的各组蛋白表达均大于正常Lewis肺癌荷瘤小鼠组,其中Bip、IRE1α蛋白表达差异最明显(P<0.01);G组的各组蛋白表达高于GF组,且差异具有明显的统计学意义(Bip,P<0.01;IRE1α,P<0.01;XBP1,P<0.05)。与N组各蛋白表达相比较,NF组各蛋白表达量较低,其中以Bip蛋白最明显(P<0.05)。9)Western Blot PI3K-AKT-mTOR通路结果显示:14天时,G组pAKT的蛋白表达高于GF组,差异有统计学意义(P<0.05);G组的PI3K、mTOR的蛋白表达高于GF组,且差异有明显的统计学意义(P<0.05);其余蛋白各组之间无明显统计学意义(P>0.05)。在21天时,G组PI3K、mTOR、pmTOR的蛋白表达高于N组,差异有统计学意义(P<0.01);G组的PI3K、mTOR、pAKT、pmTOR的蛋白表达高于G组,且差异有明显的统计学意义(P<0.01);NF膏组各蛋白表达量均低于N组,其中以pAKT差异最显著(P<0.01)。表明肺瘤平膏能降低IRE1α-XBP1及PI3K-AKT-mTOR通路蛋白表达含量。结论:1)XBP1过表达能抑制的Lewis肺癌中TDCs抗原呈递功能,导致脂质堆积增加;2)肺瘤平膏能逆转因脂质堆积导致的TCDs的功能缺陷,增强TDCs的抗原提成功能;3)肺瘤平膏增强TDCs表型和功能可能是通过降低内质网介导的IRE1α-XBP1通路的活化而下调PI3K-AKT-mTOR信号通路实现的。