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中性纤维素内切酶（中性EG）在牛仔布生物石洗中具有很高的应用价值，但国内中性EG不具有自主知识产权，因此，发掘全新中性EG，对于打破国外中性EG的垄断地位具有重要意义。完整中性EG和截短中性EG在牛仔布生物石洗上有不同表现，这与纤维素酶的纤维素结合区相关，但深层次原因还尚未发现。本文主要研究中性EG的生产菌株筛选、发掘、异源表达以及酶学性质表征，初步研究中性EG在牛仔布生物石洗上的应用，具体研究内容和结论如下。 第一部分，BacillussubtilisLH中性EG的基因发掘、异源高效表达、表征及其应用于生物石洗的基础研究。 1)从鲁华生物技术研究所菌库中，筛选到产中性EG的菌株B.subtilisLH，获得B.subtilisLH的中性EG基因。PichiapastorisGS115和Escherichia.coliRosetta(DE3)分别表达了成熟中性EG（分别命名为MBSEG-1和MBSEG-2），结果表明MBSEG-2表达水平远高于MBSEG-1。采用最优产酶条件，未浓缩MBSEG-2的EG酶活可达25686U/mL，是目前所有报道的最高水平。 2)MBSEG-1和MBSEG-2的酶学性质相似，最适温度均为65℃，最适pH值均为6.86，既有内切酶活性又有外切酶活性，N-糖基化的有无引起了酶在热稳定性、木瓜蛋白酶有限水解上的差异。 3)基于截短MBSEG-2以及完整MBSEG-1和MBSEG-2水洗牛仔布实验，并结合蛋白3D模型分析，发现具有高比例的表面疏水氨基酸和芳香氨基酸的EG有助于提高牛仔布的除毛率和脱色率，而与EG（但必须有催化域）的完整性无关。 第二部分，真菌PetriellasetiferaLH的鉴定，中性EG的表征及其应用于生物石洗的基础研究。 从鲁华生物技术研究所的保存土壤中，筛选到一株产中性EG的真菌，基于延伸因子基因（EF-1α）部分序列的系统发育树的分析，并结合真菌形态学特征，鉴定该真菌为Pe.Setifera，命名为Pe.setiferaLH。Pe.setiferaLH的中性EG于40℃时可保持80％以上的相对酶活，最适pH为6-7，水洗牛仔布的效果与商业化中性EG相当，揭示了它在牛仔布生物石洗上具有潜在的应用价值。 第三部分，真菌Phaeosphaeriasp.LH21两个中性EG的基因发掘、序列分析及酶学性质表征。 1)从极端环境的深海淤泥中，筛选到一株产中性EG的真菌，基于EF-1α部分序列和18SrDNA部分序列的比对分析，鉴定该真菌为Phaeosphaeriasp.，命名为Phaeosphaeriasp.LH21。 2)采用基因组走读技术和RT-PCR方法，首次克隆了Phaeosphaeriasp.LH的两个全新EG(GH45EG-1和GH45EG-2)基因。GH45EG-1和GH45EG-2全长分别为235和233个氨基酸。通过NCBIBLAST对氨基酸序列进行比对分析，表明GH45EG-1和GH45EG-2属于糖苷水解酶第45家族，仅有催化域无纤维素结合区，其氨基酸序列和已知EG氨基酸序列分别拥有71％和63％的最大一致性。 3)基于两个成熟EG（mGH45EG-1和mGH45EG-2）和HumicolainsolensEGV氨基酸序列之间的比对分析，再根据蛋白3D结构模型的分析，推测mGH45EG-1其中一个活性中心位点为Asp16，推测mGH45EG-2活性中心位点为Asp122和Asp11，推测它们催化机制为反转机制。 4)mGH45EG-1和mGH45EG-2分别于P.pastorisGS115中表达。重组酶mGH45EG-1和mGH45EG-2的底物谱证实它们属于内切酶类型，对羧甲基纤维素钠具有最高降解活性，对结晶纤维素和滤纸降解的相对酶活仅为0.1-0.3％。10mMCa2+和Mg2+提高了8-27％重组酶mGH45EG-1和mGH45EG-2的相对酶活，多数金属离子对它们有抑制作用。重组酶mGH45EG-1和mGH45EG-2最适pH值均为8，在pH5-10时相对酶活均在75％以上，于50℃及pH3-10保温1h后相对残余酶活均在90％以上，最适温度分别为65℃和60℃。