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尽管近年HIV新感染人数有所下降,全球总HIV感染人数仍在增加。半数以上感染者为女性。在艾滋疫苗反复受挫的情况下,杀微生物剂为女性自主预防HIV性传播提供了有效措施。然而,杀微生物剂也可能诱导宫颈阴道粘膜炎症,反而会促进HIV感染,成为杀微生物剂临床应用的难题。因而,一种杀微生物剂的有效性依赖于它的抗病原体的特异活性和安全性之间的精美平衡,其粘膜安全性评价是杀微生物剂的研发工作中不可或缺的一部分。
本研究应用具有明确致炎活性的壬苯醇醚9(nonoxyno1-9,N9)、十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulphate,SDS)及苯扎氯铵(benzalkonium chloride,BZK)作为模式杀微生物剂(即阳性对照),赋形剂羧甲基纤维素(carboxymethylcelluose,CMC)和溶媒剂PBS作为阴性对照,建立了体外和体内两个系统来评价杀微生物剂的粘膜安全性。体外模型用粘膜上皮细胞评价杀微生物剂细胞毒性。结果发现Caco-2细胞(结肠癌细胞系)和ME-180细胞(宫颈癌细胞系)对N9、SDS和BZK3种杀微生物剂都非常敏感,能够很好的判定它们的细胞毒性。BZK细胞毒性最强,N9次之,SDS最弱,与文献报道一致。体内动物模型选用雌性C57BL/6小鼠,采用安宫黄体酮同步化小鼠生殖周期。用N9、SDS和BZK等杀微生物剂处理小鼠生殖道粘膜一定时间,获取生殖道粘膜分泌液。结果发现,第一,经杀微生物剂处理后,与以往用作杀微生物剂致炎标记物的MCP-1和IL-6相比,阴道粘膜样中的L-selectin、P-selectin、VCAM-1、IgG和IgA持续分泌的时间更长、灵敏度更高、广谱性更高、与组织病理学损伤的相关性更高;第二,杀微生物剂处理引起巨噬细胞浸润增加,进一步研究发现M2型(抑炎型)巨噬细胞减少,M1型(促炎型)巨噬细胞无变化;第三,HIV假病毒实验发现,杀微生物剂处理后引起阴道组织中病毒含量增加,提示增加HIV感染风险。此外,ELISA检测临床样本,发现与正常对照组相比,阴道炎患者阴道分泌液中含有更高水平的L-Selectin、P-Selectin和VCAM-1。综上所述,本研究建立了一套包括体外和体内两方面的较完善的杀微生物剂粘膜安全性评价系统,并首次发现L-selectin、P-selectin、VCAM-1、IgG和 IgA较炎性细胞因子MCP-1和IL-6而言,是更为合适的杀微生物剂致阴道粘膜炎症的生物标记物。