双氢青蒿素和电离辐射诱导A549细胞凋亡的作用机制研究

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细胞凋亡是一种高度有序的程序性死亡的方式,它主要通过两条途径来启动:死亡受体途径和线粒体介导的途径。因此,激活细胞凋亡途径成为抗癌药物研究的新热点,目前已成为抑制恶性肿瘤增殖的一种治疗手段。双氢青蒿素(DHA),是我国学者首次从菊科植物黄花蒿(Artemisia annua)中提取的新型的一线抗疟疾药,近年来的越来越多的研究证明,其还具有抗肿瘤的作用。电离辐射(IR)是目前临床上普遍应用的治疗癌症的方法,但是高剂量的电离辐射给病人带来很严重的副作用。虽然前人付出了很多努力研究双氢青蒿素和电离辐射的抗肿瘤机制,但是双氢青蒿素单独处理以及与电离辐射联合处理对人肺腺癌细胞的作用机制仍然不清楚。  本文第一章绪论部分总结了凋亡信号转导通路的研究现状,概述了DHA以及IR目前的国内外研究现状,同时说明了本课题研究的目的和意义。  本文的实验工作主要分为两个部分:  在第一部分的实验工作中,本文采用CCK-8、流式细胞仪、激光共聚焦成像、荧光底物实验和蛋白免疫印迹等技术在人肺腺癌细胞(A549)中检测了DHA诱导了外源性为主的细胞凋亡。我们的实验结果表明:(1)DHA以剂量与浓度依赖性的方式诱导细胞凋亡;(2)DHA诱导了caspase-8和caspase-9依赖的凋亡,而且caspase-8在凋亡的早起起了主要的作用,晚期通过切割Bid来启动内源性凋亡途径;(3)Bax和Bcl-XL而非Bak和Mcl-1参与到DHA诱导的细胞凋亡;(4)Bim转位到内质网却没有参与DHA诱导的细胞凋亡中。本章在对DHA诱导的人肺腺癌A549细胞凋亡的机制研究中取得初步的进展,对DHA与电离辐射联合诱导A549细胞凋亡的后续研究奠定了良好的基础。  在第二部分的实验工作中,我们通过CCK-8、流式细胞仪和荧光底物等实验检测由DHA和电离辐射以联合的方式诱导了ROS介导的外源性细胞凋亡。我们的实验结果表明:(1)电离辐射单独处理能够诱导剂量依赖的G2/M期周期阻滞,在处理36h后,低剂量的电离辐射诱导的周期阻滞能够恢复正常;(2)低剂量的电离辐射以合成的方式加速了DHA诱导的ROS产生caspase-8和caspase-3的活化,不可恢复的G2/M期周期阻滞和细胞凋亡;(3)但是电离辐射没有加强DHA诱导的线粒体膜电位下降和caspase-9的活化。  总之,我们的结果表明ROS介导的外源性途径在DHA和电离辐射联合介导的A549细胞凋亡中发挥着重要的作用。
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