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研究背景
miRNA是真核生物中一类长度约为19-25个核苷酸的参与基因转录后水平调控的非编码单链RNA。miRNA的表达改变与肿瘤的发生以及发展密切相关,其作用具有广泛性和复杂性,已经发现的人类miRNA大部分(5296)位于已知的肿瘤相关基因组区域内或已知的基因脆性位点(fragilesites,FRT),可能同时具有癌基因和抑癌基因的双重作用。越来越多的与细胞增殖失控、分化成熟障碍、细胞永生化为本质的肿瘤疾病密切相关的miRNA被发现,人类肿瘤细胞和肿瘤组织内miRNA的表达水平以及类型都与正常细胞和组织的miRNA表达水平明显不同,miRNA及其调控的编码基因产物控制着多种肿瘤发生发展的基本信号通路,初步揭示了miRNA在肿瘤发生机制、诊断和预后的生物学标记和治疗靶点等方面发挥着重要作用,进而可能为肿瘤治疗提供一个新的切入点。宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于乳腺癌。据统计,全球每年约有五十万的宫颈癌新发病例,占所有癌症新发病例的5%,并且近年宫颈癌发病存在年轻化趋势。宫颈癌发病机制复杂,宫颈上皮内瘤变(cervicalintraepithelialneoplasia,CIN)是与宫颈浸润癌密切相关的一组癌前病变,它反映宫颈癌发生发展中的连续过程,常发生于25_35岁妇女。CIN各级处于双相变动状态,宫颈病变的这种相对漫长及可逆转的发展过程,使干预和治疗宫颈癌前病变、有效预防浸润性宫颈癌的发生成为可能。目前关于miRNA与宫颈癌前病变和宫颈癌的研究越来越多。近年来,由于不但参与并调控了上皮间质细胞的转化(epithelial-esenchymaltransition,EMT)过程,并且在肝癌、卵巢癌、胃癌、子宫内膜癌等癌瘤中均有异常表达,miRNA-200家族得到了人们的广泛关注。考虑到miRNA组织特异性的特点,本课题通过qPCR方法以其中miRNA-200b为研究对象,探讨其在另一妇科癌瘤——宫颈癌发生、发展过程中的表达。
研究目的
1、探讨miR-200b在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中的差异表达。
2、在差异表达的miR-200b的基础上,分析不同宫颈组织与miR-200b靶基因的生物学关系,为进一步研究宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的发病机制提供理论依据。
研究方法
选取首都医科大学附属北京妇产医院妇瘤科及北京市海淀区妇幼保健医院阴道镜门诊2010年1月至2011年12月正常宫颈、不同级别宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织共计52例,分别用Trizol一步法提取总RNA,用q-PCR方法测定各级组织中的miR-200b含量。以生物信息学软件TargetScanHuman5.1软件在线预测miR-200b的染色体定位和靶基因预测。
结果
1.成功提取子宫颈癌、各级宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织中的总RNA。
2.用q-PCR方法测定各级宫颈组织中的miR-200b含量,发现:①miR-200b在宫颈上皮内瘤变与宫颈癌组织中都有表达;②miR-200b的表达量Act值显示高度CIN＞低度CIN＞正常＞宫颈癌组,各组的表达量都显示这样的特点。③数据输入SPSS13.0统计学软件,进行计量数据t检验,以P＜0.05为检验水准,发现高度CIN组和正常组、高度CIN组和宫颈癌组之间的表达有显著性差异。
3.运用生物信息学软件TargetScanHuman5.1预测分析,发现miR-200b基因定位于1号染色体;在人类基因组中与miR-200b有关韵靶基因1057条,包括1202个保守的靶位点和525个非保守靶位点,其中E盒结合锌指蛋白(zincfingerE-box-bindingprotein,ZEB)家族包括ZEB1和ZEB2全部在列,而且高居表首。
结论
1、用q-PCR方法测定各级宫颈组织中的miR-200b含量,发现miR-200b在富颈上皮内瘤变与宫颈癌组织中的表达有差异;
2、正常宫颈、宫颈病变各组和宫颈癌组的表达量△Ct值显示高度CIN＞低度CIN＞正常＞宫颈癌组,并且各组的表达量都显示这样的特点;
3、统计学分析发现,高度CIN组和正常组、高度CIN组和宫颈癌组之间的表达有显著性差异。
4、miR-200b在高度CIN中显著高表达,是miRNA在宫颈病变发展过程中阶段特异性的具体表现。高度CIN是宫颈病变由轻到重的不可逆阶段,是经济发达地区宫颈癌筛查的重点。miR-200b在宫颈病变发展的过程中,有重要的意义。