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猪圆环病毒-Ⅱ型（Porcine Circovirus2, PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS）主要及原发病原。由于此病在世界范围内流行，同时能对猪的生长造成严重危害，极大地降低了饲料利用率，对养猪工业造成了重大影响。PCV2基因组大小为1767bp或1768bp，包含11个开放阅读框，其中ORF1、ORF2、ORF3为主要的阅读框。ORF1编码的Rep蛋白主要与病毒的复制相关，ORF3编码蛋白与病毒的致病性相关。ORF2编码的Cap蛋白为病毒的主要结构蛋白，蛋白上存在多个优势抗原表位，具有良好的免疫原性，试验证实Cap蛋白能区分PCV1和PCV2临床血清。目前，PCV2诊断方法主要为PCR、免疫组化、原位杂交、免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）、间接免疫荧光（IFA），这些方法主要用于抗原检测。PCV2抗体检测主要手段为ELISA，目前已有基于Cap蛋白的商品化ELISA试剂盒，但是ELISA检测方法需要专业人员和专门仪器，只适用于实验室检测。当前已经有商品化的猪圆环病毒疫苗用于猪群免疫，且免疫范围较大，因此急需一种简便、快速、敏感的检测方法用于免疫后抗体水平评价。胶体金免疫层析技术是在胶体金标记技术和免疫层析技术基础上发展而来的，该技术具有简便、快捷的特点，同时不需要任何仪器和专业人员，因此被广泛应用于疫病及药物残留检测。本研究成功制备了PCV2抗体检测试纸，为PCV2抗体临床快速检测提供了有力工具。同时筛选并鉴定了数株PCV2单克隆抗体。1.猪圆环病毒-Ⅱ型Cap蛋白的原核表达及功能鉴定为获得具有免疫原性的PCV2Cap蛋白，本试验以含有PCV2ORF2基因的重组质粒PMD18T-ORF2为模板，利用PCR技术扩增得到PCV2ORF2基因片段，将此基因片段与原核表达载体pET28a连接，构建重组表达载体，命名为pET28a-ORF2，经PCR和测序鉴定后，用IPTG诱导ORF2基因的表达，收集诱导的菌液进行SDS-PAGE电泳分析。结果显示在分子量约为26KD处有一条明显的蛋白条带。表达产物上清用Ni柱纯化并透析，Western-Blot鉴定该蛋白能被PCV2阳性血清识别，ELISA检测结果显示蛋白具有较高的活性。研究表明PCV2Cap蛋白在大肠杆菌中得到高效表达，纯化获得的蛋白具有较高生物活性，为开发诊断试剂和亚单位疫苗奠定了基础。2.猪圆环病毒-Ⅱ型抗体检测免疫层析试纸的研制及性能评价将胶体金标记猪圆环病毒-Ⅱ型（PCV2）Cap蛋白喷涂于玻璃纤维膜上作为检测探针，金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)和PCV2多克隆抗体IgG固定在硝酸纤维膜上分别作为检测线和质控线，制备组装成免疫层析试纸。运用PCV2标准阳性、阴性血清及猪瘟病毒、蓝耳病病毒、细小病毒、伪狂犬病毒、PCV1阳性血清，对试纸进行特异性、敏感性评价。免疫层析试纸与进口商品化ELISA试剂盒对田间血清样品同时进行检测，评价试纸与ELISA试剂盒的符合率。试验结果显示，该试纸的特异性、敏感性良好，与进口ELISA试剂盒符合率为94.00%(470/500)，灵敏度与ELISA试剂盒相当。表明该试纸具有快速、特异、敏感等优点，操作简便，不需要专业人员与专门仪器，适合田间推广运用。3.猪圆环病毒-Ⅱ型单克隆抗体的制备及鉴定用纯化的PCV2免疫Balb/c小鼠，使小鼠对PCV2产生免疫反应并产生抗体，取血清效价较高的小鼠脾细胞与NS0瘤细胞融合。使用基于Cap蛋白的抗体检测试纸对大量杂交瘤细胞培养上清进行检测和鉴定，同时采用病毒阻断方法评价抗体与病毒的反应情况。最终筛选出5株分泌高亲和力单克隆抗体的杂交瘤细胞：3C9、6A5、8F9、9F4、15E4，其中6A5、8F9、9F4三株能与病毒反应。结果表明，该单抗的腹水能很好地识别PCV2病毒及其Cap蛋白，效价分别为：1:4×105、1:3×105、1:4×105。具有高度的特异性，与其他病毒和蛋白无交叉反应性。该单抗的成功制备，为PCV2抗原快速检测试纸条的制备奠定了基础。