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甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)是治疗类风湿关节炎的首选药物和基础药物，而来氟米特(leflunomide，LEF)经常与其合用以提高治疗效果。MTX/LEF在临床上的联合使用会显著增加患者的肝脏毒性乃至肝纤维化，而具体的机制并未阐明。在本课题中，我们使用大鼠/小鼠动物模型，系统考察了LEF对MTX体内处置的影响，探索深层分子机制以及药代动力学改变和肝脏毒性的联系。在SD大鼠中，我们发现LEF能够显著上调MTX的体内血浆暴露量，但是MTX毒性代谢产物7羟基甲氨蝶呤(7-hydroxyl methotrexate，7OHMTX)的含量由于代谢产物量过小而无法确定。在小鼠C57BL/C中，LEF显著地同步上调了MTX/7OH MTX的血药浓度（AUC分别为各自对照组的2.4倍和4.5倍），降低了MTX/7OHMTX的胆汁外排，增加了两者的肝脏/肾脏蓄积。LEF对醛氧化酶（aldehyde oxidase，AOX）的诱导作用极其微弱，但是LEF显著诱导了肝脏血窦侧外排转运体Mrp3/4（multidrug resistance-associated protein3/4）的表达和活性而显著抑制了肝脏胆管侧Mrp2（multidrug resistance-associated protein2）的表达和活性，最终导致了这些外排转运体的底物MTX/7OH MTX的体内处置发生显著变化。随后我们发现LEF间接激活过氧化物酶体增殖激活核受体（peroxisome proliferator-activated receptorα，PPARα），一个广泛报道的Mrp2/3/4的调控核受体，而验证实验表明PPARα的抑制剂能够逆转LEF对MTX/7OH MTX体内处置的影响，即LEF很可能主要通过激活PPARα，调控Mrp2/3/4.。考虑到MTX/LEF在临床十几年甚至几十年的联合使用，LEF对MTX的药动学的改变（肝肾浓度和血浆暴露量显著提高，清除速率下降），很有可能是MTX肝毒性的重要来源。 此外，我们还利用精密肝切片这一离体肝纤维化模型，考察了MTX/LEF对肝纤维化表征的影响。在此模型上，LEF/MTX不仅没有上调肝纤维化的病理指标——胶原collagen1a1和collagen3a1，反而显著抑制了其表达。后续我们发现LEF能够显著抑制波形蛋白(vimentin)的表达，而vimentin对于胶原mRNA的稳定是至关重要的。综上所述，我们推测LEF很有可能通过抑制vimentin的表达以及抗增殖的药效作用，达到抑制肝纤维化的发生的作用。因此LEF对于MTX肝毒性增敏作用和LEF的免疫抑制作用很可能无关，而主要是改变MTX体内处置的结果。