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猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS），又称蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种持续或间歇性出现的一种重度疾病。PRRSV的ORF1a，ORF1b分别编码非结构聚合蛋白pp1a以及pp1ab。随着基因组mRNA合成以上这两种蛋白质，pp1a和pp1ab被ORF1a编码的木瓜蛋白酶样半胱氨酸蛋白酶(PCP)(nsp1)、3C-半胱氨酸蛋白酶(nsp2)和丝氨酸蛋白酶(nsp4)裂解成14个不同功能的非结构蛋白。其中的nsp1α可抑制IκB的磷酸化，从而抑制NF-κB的激活基因，导致NF-κB的失活，进而抑制IFN-β的产生。nsp11可通过触发dsRNA来调节PIG-1介导的信号通路抑制IFN-β的产生。 RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由双链RNA启动的特异性沉默机制，可抑制或关闭相关序列基因的表达，近年来，随着分子生物学的发展，RNAi技术已经广泛应用在动物传染病的防治、癌症、基因功能的研究等各个领域。siRNA同内切核酸以及其他蛋白一同形成RISC(RNA-induced silencing complex)。其中核酸部分可引导蛋白部分降解mRNA，阻断靶基因翻译成蛋白质。 本研究人工设计并合成PRRSV非结构蛋白nsp1α和nsp11的siRNA，将对应的siRNA分别与重组质粒pcDNA3.1-nsp1α-GFP，pcDNA3.1-nsp11-GFP共转染293T细胞，MARC-145细胞。通过荧光显微镜观察细胞中nsp1α和nsp11蛋白表达量，Western Blot试验检测nsp1α和nsp11蛋白表达量，间接免疫荧光试验检测病毒在细胞中的复制，以及在MARC-145细胞中病毒TCID50的测定，揭示siRNA对PRRSV非结构蛋白nsp1α和nsp11表达的抑制效果。 荧光倒置显微镜的观察结果显示，靶向siRNA可抑制重组基因蛋白的表达。Western Blot结果显示，siRNA对重组质粒蛋白表达的抑制效果不显著。间接免疫荧光试验结果显示，siRNA可显著抑制PRRSV病毒蛋白在Marc145中的表达。对病毒TCID50测定显示siRNA可显著抑制PRRSV的复制，同时在MARC-145细胞中只表达pcDNA3.1-nsp1α-GFP，pcDNA3.1-nsp11-GFP时，可促进PRRSV的复制。