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目的：本项研究主要探讨脱氧核糖核酸甲基转移酶(deoxyribonucleic acid methyltransferases,DNMTs)在卵巢肿瘤组织和卵巢正常组织等不同组织中的差异表达,同时运用数字差异显示技术(DDD)寻找卵巢肿瘤中特异性的非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)。
方法：收集卵巢癌18例(囊腺癌17例,透明细胞癌1例,其中14例已经发生转移),卵巢良性肿瘤13例(其中畸胎瘤3例,卵巢浆液性瘤2例,纤维瘤3例,颗粒细胞瘤1例,其他良性肿瘤4例)和卵巢正常组织7例(卵巢正常组织取自患有子宫肌瘤或良性卵巢肿瘤的临床上有手术指征的绝经后病人),共收集组织标本38例。收集的组织标本立即放入液氮冻存,后加入Trizol研磨匀浆,提取总RNA。对上述提取的.RNA进行逆转录,并应用普通PCR技术对部分组织进行半定量分析。应用real-time PCR分别分析上述组织的DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的mRNA的表达水平。为进一步分析在卵巢肿瘤组织中高表达的DNMT1和DN:MT3B是否具有相当水平的蛋白表达,应用免疫组化技术分析卵巢正常组织和卵巢肿瘤组织中蛋白表达水平的差异；应用数字差异显示技术寻找卵巢肿瘤中特异性表达的ncRNA,并应用普通PCR和测序分析进行验证。
结果：研究发现DNMT1、DNMT3A、DNMT3B三种主要的甲基转移酶中DNMT1在卵巢癌中的mRNA表达水平高于卵巢良性肿瘤组织和卵巢正常组织的表达水平(P=0.0092和P=0.0168),在卵巢良性肿瘤组织的表达水平与卵巢正常组织中的表达水平无明显差异(P=0.7674)；DNMT3B在卵巢癌组织的mRNA表达水平高于卵巢正常组织的表达水平(P=0.0272),而卵巢癌与卵巢良性肿瘤组织以及卵巢良性肿瘤组织与卵巢正常组织之间无显著性差异(P=0.2073和P=0.0572)。DNMT3A在卵巢癌中的mRNA表达水平与卵巢正常组织及卵巢良性肿瘤组织均无明显差异(P=0.3227)。免疫组化结果显示DNMT1定位在细胞核,在卵巢肿瘤中表达水平高于正常对照组；DNMT3B定位在细胞核和细胞质,在卵巢癌中表达水平高于卵巢正常组织,这也与我们的定量PCR结果相一致。我们运用数字差异显示技术寻找到两条基因Hs.714487和Hs.479728,通过分析发现其无明显的阅读框,因此可能是ncRNA,并用普通PCR和测序分析初步验证Hs.714487。
结论：DNMT1甲基转移酶表达水平高低可能与卵巢肿瘤的恶性程度有关,而DNMT3B在卵巢肿瘤发生中的作用尚不清楚,其作用的机制还需要我们进一步研究。